This site uses cookies.
Some of these cookies are essential to the operation of the site,
while others help to improve your experience by providing insights into how the site is being used.
For more information, please see the ProZ.com privacy policy.
مترجم تحريري حر و/ أو مترجم فوري حر , مستخدم تم تأكيد شخصيته
Data security
This person has a SecurePRO™ card. Because this person is not a ProZ.com Plus subscriber, to view his or her SecurePRO™ card you must be a ProZ.com Business member or Plus subscriber.
القانون: براءات الاختراع، العلامات التجارية، حقوق الملكية
القانون عموماً
براءات الاختراع
More
Less
Volunteer / Pro-bono work
Open to considering volunteer work for registered non-profit organizations
التعرفة
سجل المشاريع الماضية
0 المشاريع المُدْخَله
مدخلات البلوبورد التي تمت بمعرفة المستخدم
1 مُدْخَله
Access to Blue Board comments is restricted for non-members. Click the outsourcer name to view the Blue Board record and see options for gaining access to this information.
أنجليزي إلى عربي: Tarpaulin structure General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: القانون عموماً
لغة نص المصدر - أنجليزي Tarpaulin structure
The invention relates to a tarpaulin structure for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts which have, on the ends, in each case a carriage which is displaceable along a guide.
Such tarpaulin structures are known from practice for the purpose of opening up openable roofs, wherein, in general, the bows are made of a pair of rods articulated to the oppositely situated carriages, which rods, at their ends situated opposite the carriages, in turn have an articulation in which a further rod is pivotably mounted. The plate that includes the joint spaced apart from the carriages then has a further joint for the connected bow, which is of similar construction. A disadvantage of the known tarpaulin structures is that the bows have a relatively large angle relative to the horizontal, which indeed facilitates the movement in a vertical direction for the raising of the tarpaulin, but which practically does not promote the transmission of forces in a movement direction. In this way, tilting of the carriages that are connected to one another by way of struts easily occurs, leading to blockage of the folding-top frame. As a countermeasure, the strut that rigidly connects the oppositely situated carriages to one another is often of very massive form, which in turn has the disadvantage that the tolerances of the guide must be reduced practically to zero so that the folding-top frame can be moved. A further disadvantage consists in that the interconnected bows, in the area of their connection, permit a relative movement with respect to one another in the direction of the guide, in the vertical direction and in the transverse direction perpendicular thereto, whereby forces and torques that are introduced into a carriage on one side practically cannot be transmitted via the bows into the adjacent carriage. This has the result that the folding-top frames of the known tarpaulin structures always require a symmetrical introduction of the movement force, that is to say, for example, the movement force must be introduced centrally, but generally must be introduced equally on both sides. A further disadvantage of the known arrangement consists in that it can be pushed together, with folding of the tarpaulin, only in an area of the understructure which still covers the loading opening of the understructure, whereby the loading opening is not fully opened up. This is a disadvantage in particular in the case of railway cars, because, as a result, a part of the loading space is lost.
DE 20 2014 005 077 U1 describes a tarpaulin structure for an understructure, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame includes a plurality of struts; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide. To each pair of opposite carriages, at least one bow is selectively pivotally connected, forming a tarpaulin folding aid along with a bow of an adjacent pair of carriages, wherein the bows of the tarpaulin folding aid are connected to one another. Here, the connected bows include a pivot angle limiter which allows only limited pivoting of the bows, so that, when the carriages are moved, the bows cannot turn over in the direction of an open position. A disadvantage here is that, in the open state, the tarpaulin structure has a large installation height resulting from the length of the bow. Furthermore, a length compensation for adaptation to an understructure can be implemented only by selecting a clear distance of the movable portion of the folding-top frame from a rear abutment and the bow connected thereto. A covering bow must be pivoted up in several steps, wherein the covering bow rests less reliably on the understructure and cannot be locked thereto in a user-friendly manner.
US 2007 006 35 30 A1 describes a tarpaulin structure for an understructure, with a folding-top frame and with a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame includes a plurality of struts; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide. Here, on both sides of the strut, a bow is pivotally connected in each case to the strut close to the carriage, wherein the bow forms a tarpaulin folding aid along with a bow of an adjacent strut. Here, the adjacent bows are in each case connected non-rotatably to a cantilever in the area of the bow sections facing away from the carriage, in such a manner that the mutually facing cantilevers of the mutually facing bows are connected in a single joint formed by a cylindrical pin extending substantially over the width of the folding-top frame, in such a manner that, when the folding-top frame is closed, the pin protrudes above the upper area of the struts and thus lifts the tarpaulin and prevents it from sinking down into the areas between the mutually facing bows. One disadvantage here is that the tarpaulin can then not be arranged without play in the area of the carriage, since the tarpaulin must also reproduce the lifting movement of the lifting hoops. Another disadvantage is that the rigid cantilevers are not capable of compensating for length differences of the folding-top frame, but instead can only be used in precisely defined sizes due their angular position with respect to the bow supporting them.
US 7 325 855 B2 describes a tarpaulin structure for a semi-trailer, wherein a folding-top frame carries a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame includes a plurality of U-shaped struts; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide. Here, in each case, bows are articulated on both sides of the struts, on the one hand, in the area of the carriage, and, on the other hand at about half-height of the strut, wherein the upper bows can be pretensioned by a spring arrangement in an actuation direction, while the lower bows in the area of the side wall are connected to one another by a coupling rod which supports a U-shaped lifting strut extending over the width of the folding-top frame. This tarpaulin structure too allows only certain sizes, implemented as a multiple of the distance separating the struts, since the interconnected struts cannot be dimensioned flexibly.
EP 0 955 196 A1 describes a tarpaulin structure for a railway car, in which a tarpaulin made of weather-resistant material is supported by a folding-top frame, wherein the folding-top frame includes a plurality of U-shaped struts; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide provided in the area of the loading surface. To the struts, on both sides, a connecting rod is connected in each case, wherein the mutually facing connecting rods of the adjacent struts are connected to one another and to a cylindrical, vertically oriented guide sleeve, in which a U-shaped lifting strut is vertically movably accommodated, which, when the adjacent struts are moved together, are lifted upward by the pivoting of the connection rods. A disadvantage of the tarpaulin structure is that the struts have to be arranged very close to one another, so that an overall very large-size folding-top frame of relatively heavy weight and with very small clear opening results therefrom.
DE 10 2013 201 006 A1 describes a tarpaulin structure designed in the form of a sliding roof for a truck, in which a substantially flat tarpaulin made of weather-resistant material is connected to a folding-top frame, in order to enable the opening and closing of the roof. The folding-top frame includes a plurality of struts designed as elongate hoops, which in each case can lift lifting elements arranged in each case between the adjacent carriages and are designed in the form of a connecting rod. The carriages are movable along a roof rail which forms a guide, wherein a portal beam is pivotally connected to the frontmost pair of carriages, wherein the tarpaulin is also connected to the portal beam. The portal beam extending transversely to the opening direction is connected on both sides via a kinematic linkage designed as a four-joint kinematics to the frontmost carriage, wherein the frontmost carriage in addition includes two struts spanning over the roof opening and designed as hoops, wherein the connecting rods of the four-pivot joint rest at least partially in a recess of the frontmost carriage arranged substantially beneath, but at least at the height of the guide, when the portal beam is lowered. The tarpaulin structure includes a locking arrangement with a first locking member guided in a frontmost carriage and with a second locking member guided in the opposite frontmost carriage, locking members which are in each case tensioned by a spring in locking direction and as a result of actuation are simultaneously axially movable in their respective unlocking direction. For this purpose, each bolt is connected to a rope associated with it with an actuation device on the opposite side, wherein the two ropes lie next to one another in the area between two struts, without being guided on the struts. The two ropes are coupled to one another in the center of the tarpaulin structure, and thereby a one-sided actuation of the two locking members is actuated. However, a disadvantage here is that the transported goods can catch on the ropes, and an unintended opening of the roof can occur.
FR 2 653 478 A1 describes a tarpaulin structure for a semi-trailer, wherein a folding-top frame is arranged in the roof area, to which folding-top frame a tarpaulin made of weather-resistant material is connected, enabling an opening and closing of the roof. The folding-top frame includes a plurality of struts designed as elongate hoops; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide formed by a pair of longitudinal supports. Between the adjacent struts, a lifting hoop is arranged in each case, which is non-rotatably coupled to an elongate connecting rod articulated to a carriage, resulting in a tarpaulin folding aid which results due to the pivoting movement of the elongate connecting rod forming a bow which can be pivoted around the carriage along with the lifting hoop, wherein the bow is connected by means of a toggle link made of two connecting rod parts to the adjacent carriage. The known sliding roof moreover includes an end-side covering bow which is designed similarly to the lifting hoop and is pivotally connected to the frontmost pair of carriages. In the side area of the covering bow, a plate-shaped locking catch is arranged, which, during the downward pivoting, in the area of the openable end of the longitudinal support, works together with a pin connected to the longitudinal support, so as to lock the folding-top frame. Here, in the closed state of the plate of the tarpaulin structure, the plate body rests partially on a horizontal portion of the carriage, while a pretensioning means pretensions the covering bow in the opening direction. In the completely closed state, the direction of action of the spring with respect to its articulation on the covering bow is such that a top dead center locking occurs, which has to be overcome by pushing the covering bow vertically upward. The folding-top frame can be actuated by a crank. A disadvantage is in particular the set-up kinematic by the pivotable lifting hoop.
DE 10 2012 006 385 A1 describes a tarpaulin structure for a commercial vehicle, in which the tarpaulin made of weather-resistant material is connected to a folding-top frame forming a sliding roof, wherein the folding-top frame includes a plurality of struts extending in the roof plane and designed as elongate hoops; at the end, each of the struts has a carriage that is movable along a guide formed by a longitudinal support. On the frontmost (in driving direction rearmost) strut, a portal beam which is also movable along the guide is connected, wherein, in the area of one of the two carriages of the frontmost strut, a locking arrangement is provided, which locks the carriage with respect to the guide formed by the longitudinal support, wherein the locking arrangement can be unlocked by unilateral pulling on a loop. The locking arrangement is provided on only one side of the frontmost strut and cannot readily lock the folding-top frame to the two elongate supports. The locking arrangement includes a first locking member and a second locking member, which are arranged on the same longitudinal side of the tarpaulin structure and which are simultaneously movable in an unlocking direction by actuation of the pulling loop. A disadvantage of the tarpaulin structure is in particular the fact that a common unlocking of in each case one locking arrangement on both sides of the tarpaulin structure by actuation from outside cannot be done by an operating person.
WO 2007 056 989 A2 describes a tarpaulin structure with a folding-top frame which is provided for supporting a tarpaulin, in which the folding-top frame includes a plurality of struts designed as elongate hoops, which are movable via carriages along a guide designed as longitudinal support in the roof area, wherein, to the frontmost carriage, a locking member with a sliding guide is pivotally connected, which works together with a second locking member connected to the longitudinal support in such a manner that the locking is released when the tarpaulin is pulled in closing direction.
EP 0 778 169 B1 describes a tarpaulin structure for the roof area of a truck, in which a folding-top frame supports a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame includes a plurality of struts designed as elongate hoops; at the end each of the struts has a carriage that is movable along a guide formed by two longitudinal supports. The adjacent hoops are coupled by articulation to said connected pairs of folding plates, wherein each of the two folding plates is connected by articulation by means of a continuous hoop. On the frontmost strut, a covering bow implemented as a portal beam is connected, which is subjected to the action of a cylinder in a movement direction, wherein, in the area of the arm of the covering bow, a hook is provided on both sides, which is pivoted by a pin with an end facing away from the hook, the hook portion of which engages with an additional pin for a positive-connecting engagement. On the portal beam of the covering bow, an additional pin is provided, which is gripped by a pivotable hook pivotally connected to the longitudinal support, in order to secure the portal beam from being lifted. If the folding-top frame is to be opened, it is necessary to first enter the inner space, and the pivotable hook has to be pivoted free, before the covering bow can be lifted. An unlocking from outside of the folding-top frame, which would avoid entry into the tarpaulin structure, is not possible. Furthermore, the connection of the covering bow to the guide occurs directly in each case, so that a setting up of the covering bow by moving the frontmost carriage along the guide is not possible.
DE 10 2012 216 151 A1 describes a tarpaulin structure for a dump truck, in which a tarpaulin made of weather-resistant material over a folding-top frame of the tipping trough can be opened for clearing an opening and closed again. The folding-top frame includes a plurality of U-shaped struts, each of the struts being connected at the end to a guide element, wherein the guide elements are coupled to a drivable actuation rope. A covering bow which in the closed state of the tarpaulin structure rests substantially flat on the tipping trough is rotatable around a folding axis, wherein a pin arranged on the understructure pivots an extension of the covering bow from a set-up position into a lowered position and vice versa. During the lowering of the covering bow, a spring which loads the covering bow in opening direction is tensioned, so that the extension rests on the pin. If the folding-top frame is moved in opening direction, the spring causes the covering bow to pivot upward without the assistance of an operating person.
It is the object of the invention is to indicate a tarpaulin structure having a low own weight that enables a reliable covering of an understructure.
This object is achieved according to the invention with the features of an independent claim.
According to an aspect of the invention, a tarpaulin structure for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, is created, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts which have, on the ends, in each case a carriage which is diplaceable along a guide. Here, at least one bow is pivotally connected either to a pair of opposite carriages of the strut or to the strut, wherein the bow forms a tarpaulin folding aid along with a bow of an adjacent strut or of a pair of opposite carriages or of a stationary part of the folding-top frame, by means of which the tarpaulin can be folded when the folding-top frame is shifted together. The tarpaulin structure is distinguishes in that the adjacent bows are coupled to one another by means of a kinematic connecting rod assembly that can be folded up when the folding-top frame is moved together.
Advantageously, it is achieved thereby that, when the folding-top frame is open and the understructure is thus uncovered, the tarpaulin structure has a short total installation height, since the bows can be arranged at a relatively small angle with respect to the struts. In order to be able to move together the adjacent bows in a controlled manner, that is to say the bows turned toward one another, the kinematic connecting rod assembly assists, in that a force introduced into the folding-top frame leads to the folding up of the kinematic connecting rod assembly. The resulting lengthening of the active bows does not occur to the detriment of the installation height of the tarpaulin structure, instead it achieves a particularly advantageous packing density due to the folding up of the kinematic connecting rod assembly. As a result, it is not necessary for the adjacent connecting rods to be in contact with one another in order to move together the folding-top frame, instead, by the targeted folding up of the kinematic connecting rod assembly, a determined behavior of the folding-top frame during the moving together is achieved, so that in particular a tilting of the struts with respect to the guide is also prevented, and a pulling force introduced into the tarpaulin structure on one side is reliably transmitted from the pair of carriages into which the pulling force is introduced to the additional pairs of carriages which are connected each by a strut.
A particular advantage of the tarpaulin structure according to the invention can be seen in that the tarpaulin structure can be adapted substantially more flexibly to length requirements of the understructure. Thus, for the adaptation to the distance between adjacent carriages, the provision of a kinematic connecting rod assembly makes it possible to select the length of the connecting rod or of at least one connecting rod to be shorter or longer. Alternatively, in the case of a fixed length of the connecting rod of the kinematic connecting rod assembly, the setting angle of the connecting rods can be set differently, in order to achieve a corresponding length compensation.
Preferably, the kinematic connecting rod assembly can be folded downward, when the folding-top frame is moved together, so that the shifting movement of the parts of the kinematic connecting rod assembly substantially has a vertically downward directed component. Said movement is superposed by additional movements due to the pivot articulation connection of the parts of the kinematic connecting rod assembly. Overall, by the provision of a downward directed folding, the kinematic connecting rod assembly can be connected very high up to the mutually facing bows, where said bows already are very close to one another, so that the kinematic connecting rod assembly overall takes up only little space. Furthermore, thereby, a very large area under the connection to the bows is provided, into which the kinematic connecting rod assembly can give way. The downward movement should not be understood in an absolute sense, since, by the pivoting of the bows, the articulation of the kinematic connecting rod assembly on the bows is moved upward during the opening of the tarpaulin structure.
Here, the folding up movement of the kinematic connecting rod assembly does not necessarily have to occur exclusively downward, instead it is sufficient if a downward directed component is included or predominates. Thus, the kinematic connecting rod assembly can also lead to a three-dimensional movement, for example, to a movement in which the tarpaulin is pressed to some extent outward, in order to avoid a jamming of the tarpaulin between the parts of the folding-top frame, in particular between adjacent bows or between bow and strut.
Advantageously, the kinematic connecting rod assembly includes a toggle link, wherein the bend of the toggle link is provided preferably approximately and particularly preferably absolutely centrally, wherein, when the folding-top frame is moved together and the kinematic connecting rod assembly is thus folded up, the bend is advantageously moved downward. The toggle link is a particularly simple kinematic connecting rod assembly which requires only three articulation points and by which a connection of the mutually facing bows can be achieved. A particular advantage of the toggle link consists in that, due to the small play of the articulation pin in the articulation eye, the folding-top frame has little tendency to move as a result of influences of the surroundings during transport. Furthermore, thrust forces can be transmitted to some extent. However, it is also possible that, in addition to the articulation pin which can be pivoted in an articulation eye, the toggle link also includes an oblong hole-type articulation eye, resulting in a certain axial guidability of the articulation pin in the oblong hole-type articulation eye in the manner of a sliding track. The force acting in the movement direction of the folding-top frame then leads to a movement of the articulation point in the area of the bend, whereby the movement of the bend is achieved with higher reliability. Alternatively, a kinematic connecting rod assembly can also be considered, which is designed as a scissor articulation, or a kinematic connecting rod assembly which is designed as having multiple articulations, in particular four articulations. The multiple-articulation kinematic connecting rod assembly, which is likely to be of asymmetric design, has indeed a higher number of parts, but, on the other hand, the course of its movement is more predetermined. A kinematic connecting rod assembly containing multiple bends is also considered.
The connecting rods of the kinematic connecting rod assembly can be designed either as rigid lever-like connecting rods or as plastic parts or as wire components, as long as a defined pivoting of the connecting rods with respect to one another and preferably also with respect to the bows to which they are fastened is obtained. Advantageously, one of the connecting rods is implemented with a step, so that it can pivot past the other connecting rod. The step then also forms an abutment for the other connecting rod, which limits the minimum angle between the two connecting rods. It is also possible to limit the maximum pivot angle by an abutment, for example on the connecting rods in the area of the common articulation.
According to a preferred design, the kinematic connecting rod assembly includes a first connecting rod and a second connecting rod, wherein each of the first connecting rod and second connecting rod in each case is connected to one of the two adjacent bows, wherein the first connecting rod and the second connecting rod are connected to one another via an articulation. The articulation then forms the bend of a toggle link consisting of the first connecting rod and the second connecting rod, wherein the first connecting rod and the second connecting rod can be folded up via the common articulation and also enable a pivoting with respect to the bows via the articulations by means of which they are in each case connected to the bows.
To reduce the risk of overturning of the kinematic connecting rod assembly, it is possible, for example, to limit the pivot angle of the connecting rods on the bow, for example, by an abutment and/or to limit the pivot angle of the common articulation of first connecting rod and second connecting rod, so that an unintentional pivoting outside of the intended pivot area of the toggle link is avoided. If the kinematic connecting rod assembly is folded up, the weight of the first connecting rod and second connecting rod leads to the common articulation moving substantially downward.
The pivot angle of the common articulation can be implemented, for example, by an elongatable connecting brace, which is connected to the first connecting rod and the second connecting rod at a distance from the common articulation, and which limits the maximum opening angle of the first connecting rod with respect to the second connecting rod. The connecting brace is particularly advantageous when the movable part of the folding-top frame is moved from the open position into the closed position, since this prevents the first connecting rod and the second connecting rod from extending in a straight line, that is to say from forming an angle of 180°, which would represent a dead point position in which there would be a risk of the bend giving way in the wrong direction.
When the folding-top frame is closed, the first connecting rod and the second connecting rod advantageously enclose an angle between 90° and 180°, wherein preferably the enclosed angle is between 120° and 170°, and particularly preferably between 150° and 165°. Since the angle is smaller than 180° and faces downward, the folding up of the kinematic connecting rod assembly downward is promoted.
The bows are advantageously designed to be U-shaped with a base and two arms, wherein each of the arms is connected to a carriage or to an arm of the strut, wherein the first connecting rod and/or the second connecting rod in each case is/are articulated to one of the arms. Thereby, the kinematic connecting rod assembly is prevented from having to be connected in the area of the base of the bows, which is turned away from the articulations of the bows, where, when the understructure is loaded, the kinematic connecting rod assembly could possibly come in conflict with the load. The bows which pivot in the direction of the strut when the folding-top frame is opened then make room for the folded kinematic connecting rod assembly or the connecting rods thereof.
Advantageously, the two adjacent bows are arranged spaced apart from one another, so that the tarpaulin folding aid formed by the two bows comprises in addition the at least one kinematic connecting rod assembly. As a rule, on both sides, a kinematic connecting rod assembly, preferably in the form of a toggle link, will be provided, so that a force acting in opening or closing direction is transmitted evenly from a pair of carriages connected by a strut via the bows and the kinematic connecting rod assembly to the adjacent pair of carriages connected by a strut, and no tilting occurs. However, it is also possible to arrange more than two kinematic connecting rod assemblies between two adjacent bows, for example, if the corresponding area of the folding-top frame should be reinforced thereby.
According to a preferred feature, it is provided that the kinematic connecting rod assembly is arranged in an area of the bow which lies outside of a space of the understructure that receives a load. Thus, as a result of the folding up, in particular downward, a collision with the load is avoided.
Alternatively or additionally, it is possible to provide in the area of the base of the bows a kinematic connecting rod assembly which connects the bases of the two bows to one another. Then, the common articulation gives way outward or inward in a horizontal plane, wherein, in the case of the provision of two kinematic connecting rod assemblies, only half the width of the folding-top frame is available for giving way in the area of the base. In addition, the space for giving way for forming a fold of the tarpaulin between the two adjacent bows is then eliminated, since a kinematic connecting rod assembly is then arranged there. It is possible to provide different kinematic connecting rod assemblies on a bow and on a base.
Particularly preferable is a tarpaulin structure in which all the pairs of adjacent bows are connected to one another by at least one kinematic connecting rod assembly and preferably by two kinematic connecting rod assemblies which are preferably in a mirror image arrangement with respect to one another, so that, between adjacent struts and/or bows, no spaces are formed, whereby the connection of the parts of the folding-top frame occurs exclusively via the tarpaulin. Thereby, a particularly advantageous and reliable behavior of the folding-top frame during opening and closing is achieved, and the tarpaulin is moreover stabilized by the folding-top frame over the entire length of the tarpaulin structure. Alternatively, it is also possible that only one pair of bows or only selected pairs of bows are connected to one another via the kinematic connecting rod assembly, while other pairs of bows are either not connected at all or optionally in direct contact with one another, or connected together by a strap, a belt or the like.
According to a preferred development, it is provided that the inclination, that is to say the tendency, of the kinematic connecting rod assembly to fold up can be adjusted by a mechanical holding arrangement. Such a mechanical holding arrangement can be, for example, an articulation brake of the common articulation, a spring member or damping element provided between the connecting rods of the kinematic connecting rod assembly, a tensioning belt or the like engaging with the bows or the connecting rods or the struts, and it makes it possible in particular that the order in which the adjacent struts move together can be controlled. Hereby, a similar mechanical holding arrangement can also be provided between bows and carriages and/or strut. According to a first preferred design, it is achieved thereby that the areas of the folding-top frame lying in the rear in opening direction fold up first, and the front segments fold only toward the end of the opening process. According to an alternative design, the front segments move together first, and at the end the rear segments together. In particular, thereby the moving together of segments of the tarpaulin structure is prevented from occurring substantially randomly, whereby the weights moved and the forces required can therefore vary considerably. Furthermore, the mechanical holding arrangement, if it contains an energy storage, can also provide assistance during the opening or during the closing of the folding-top frame.
Advantageously, the struts are of U-shaped design, wherein in the closed state of the tarpaulin structure a base of the U-shaped struts, which is turned away from the carriage, is arranged at approximately the same height as the areas of the bows, in particular the base of the bows, which is turned away from the carriage. Thereby, it is achieved that the tarpaulin which is advantageously connected to struts and bows, provides a closure of the closed tarpaulin structure in a substantially horizontal plane. Since the tarpaulin also laterally covers the arms of the struts and/or of the bows, the tarpaulin will span over the understructure substantially in a rectangular shape. Advantageously, the kinematic connecting rod assembly is arranged slightly under the plane of the base of the bow, so that the kinematic connecting rod assembly cannot interact with the roof area of the tarpaulin. At the same time, the kinematic connecting rod assembly is preferably connected very high up to the bows, in order to provide the largest possible area for descending downward, in which the parts of the kinematic connecting rod assembly do not come in contact with the guide and/or the carriage, which can lead to unpleasant noises but also to wear.
According to an aspect of the invention a tarpaulin structure for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, is created, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts wich have, on the ends, in each case a carriage, wherein the carriage is movable along a guide. At least one bow is pivotally connected to either a pair of opposite carriages of the strut or to the strut, wherein the bow forms a tarpaulin folding aid along with a bow of an adjacent strut or of a pair of opposite carriages or of a stationary part of the folding-top frame. It has to be understood that the tarpaulin folding aid moreover can contain a kinematic connecting rod assembly connecting the adjacent bows as described above. Here, on the frontmost pair of carriages, a covering bow is pivotally connected, which can cover the front portion of the understructure. Here, the frontmost carriage includes a frame section which is arranged above the guide in a horizontal plane, wherein the frame section forms a support for the covering bow in its pivoted-down state.
Thereby, it is advantageously achieved that the support for the covering bow can be moved along the guide without the covering bow lying on the understructure and without the covering bow having to form a closure with said understructure. Thereby, it is avoided in particular that, in the case of unintended damage to the understructure, the covering bow and understructure can no longer be brought together. The mutually coordinated supports and covering bows enable a substantially more sealing closure, so that transported goods are less likely to escape. At the same time, it is possible that the covering bow is articulated to the frame section, which in turn can form a component with the frontmost pair of carriages, so that the covering bow overall can be designed to be very short. A particular advantage consists in that, even if the covering bow is pivoted down, the movable part of the tarpaulin structure can be moved along the guide, or else the covering bow can be pivoted down again even if the folding-top frame is not completely closed, so that, when the covering bow is already pivoted down before the end position is reached, the movement can be continued.
Advantageously, the covering bow includes a support area arranged outside of its articulation to the carriage and which lies horizontally on the frame section. Thereby it is advantageously possible that the covering bow is adapted to the course of the tarpaulin to be reinforced by it, while the support area rests on the support when the covering bow is pivoted down. The support area can be designed to form a single piece with the covering bow, but preferably it is a brace which is connected to the covering bow.
The covering bow preferably includes an angular arm, so that the covering bow has a three-dimensional extent. Thereby, advantageously, the angular arm has a short arm section which is articulated on the frontmost carriage, and, furthermore, the angular arm includes a long arm section which is angled with respect to the short arm section by an arm angle of more than 90° and less than 145°, and preferably of approximately 120°. The support area then connects the short arm section and the long arm section in an area turned away from the arm angle, so that the support area lies approximately in a horizontal plane with the base of the covering bow. Thereby, the covering bow is designed in a particularly robust manner and with arms of triangle-like design and it can pivot around its articulation without twisting and at the same time maintain the shape of the tarpaulin by means of its angular arms.
According to a particularly preferred embodiment, it is provided that the covering bow in its open state lies horizontally with the short arm section on the frame section. Thereby, the covering bow has two stable states maintained in position by the weight of the covering bow, which are both supported on the frame section, wherein in the pivoted-down state, the support area, and in the pivoted-up state, the short arm section are each supported on the frame section. Thereby, the frontmost carriage can be moved along the guide both with covering bow opened and also with covering bow pivoted down, without the covering bow introducing a resistance against the movement into the system.
According to an advantageous development, it is provided that the articulation of the covering bow is arranged in a horizontal plane above a plane of the articulation of the bows. However, alternatively it is also possible to provide the articulation of the covering bow in the same plane or in a lower plane, or, in the design of the articulation connection of the covering bow to the carriage and/or to the frame section, to provide a connection having multiple articulations, for example four articulations, by means of which a stable position can be achieved, which does not make it necessary for the covering bow to be supported on the frame section.
Preferably, it is provided that the covering bow is articulated on the frame section, and, furthermore, that in each case at least one support roller and at least one counter-roller are connected to the frame section. Thereby, it is advantageously achieved that the covering bow can also be pivoted without connecting rod transmission around its articulation.
According to a preferred design, the covering bow protrudes at least to some extent over the frame section in the opening direction, whereby the guide, along which the frontmost carriage and the frame sections can be moved, can be designed to be slightly shorter. Thereby, a locking between the covering bow and the frame section closer to the articulation of the covering bow on the frame section can be provided.
According to a preferred development, it is provided that the covering bow in the area of its lateral arm is designed in the manner of a truss which ensures high rigidity and thereby also additionally reinforces the two frontmost carriages with respect to one another. Furthermore, it is advantageously provided that a lower horizontal brace of the truss or of the lateral arm lies at least partially on the frame section, so that in the case of a movement of the frontmost carriage the covering bow is accordingly also moved with the frame section.
Advantageously, an actuation rod protrudes from the lateral arm of the covering bow and includes a bent end section which, together with a deflection element, in a manner of a roller, brings about at least one of the pivoting up movement and the pivoting down movement of the covering bow. The actuation rod is designed as an extension of the lateral arm of the covering bow and thus enables a play-free pivoting up of the covering bow without interconnected connecting rod transmission and without the bearing play associated therewith in the associated articulations.
According to an aspect of the invention, a tarpaulin for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, is created, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts which have, on the ends, in each case a carriage whuch is displaceable along a guide. Here, at least one bow is pivotally connected either to a pair of opposite carriages of the strut or to the strut, wherein the bow forms a tarpaulin folding aid along with a bow of an adjacent strut or of a pair of opposite carriages or of a stationary part of the folding-top frame, which can contain a kinematic connecting rod assembly as described above but does not have to, for example, if the tarpaulin folding aid is achieved by bows connected to one another. Here, a covering bow is pivotally connected to the frontmost pair of carriages, wherein an auxiliary bow is articulated on the frontmost carriage between the covering bow and the strut connected to the frontmost carriage,. Like the strut, the auxiliary bow extends from one frontmost carriage of the pair of frontmost carriages to the other opposite frontmost carriage. In terms of its angular position and in its extension, that is to say substantially its height, the auxiliary bow is selected so that it supports the tarpaulin in an area between the covering bow and the strut. Here, the auxiliary bow is advantageously arranged so that it does not prevent the pivoting up of the covering bow.
According to a particularly preferred design, it is provided that, between the preferably U-shaped auxiliary bow and the covering bow, a pretensioning member is arranged, which pretensions the covering bow against its closing direction. In particular, the pretensioning member can have the effect that, when the covering bow is unlocked, said covering bow is raised against its closing direction. At the same time, the pretensioning member can have the effect that the auxiliary bow is also pivoted from its orientation with closed tarpaulin structure into a changed position. The pretensioning member thus assists a pivoting up movement of the covering bow and at the same time dampens the pivoting down covering bow to some extent. Alternatively, it is also possible to provide the pretensioning member between the covering bow and the strut arranged on the frontmost pair of carriages or to incorporate the pretensioning member in the tarpaulin.
It is also possible that, instead of a pretensioning member, a connection member in the manner of a coupling rod is in each case articulated between covering bow and auxiliary bow, whereby a kinematic connecting rod assembly with four articulations would be implemented, which advantageously couples the relative movement of the two parts. Instead of the coupling rod, another kinematic connecting rod assembly can also be provided.
Advantageously, the pretensioning member is selected from the group comprising a tension spring, a pulling strap, an elastic belt, an elastic web or tarpaulin or a combination thereof. It is possible to combine several of the mentioned possibilities with one another, in particular the inclination of the tarpaulin to pull together to some extent can be used for this purpose.
According to a preferred development, there is a distance provided between an articulation of the auxiliary bow and the strut, such that, when the folding-top frame is partially or completely open, the auxiliary bow can be transferred into a turned over position toward the strut of the frontmost pair of carriages. Thereby, in the open position of the auxiliary bow, said auxiliary bow is not held in a metastable position which has a tendency to drop, but instead the auxiliary bow can be pivoted past its dead point and thus lean against the strut or against an abutment provided for this purpose. At the same time, the pretensioning member between auxiliary bow and covering bow then works particularly effectively. The pretensioning member is designed here so that when the covering bow is pivoted up, the auxiliary bow cannot be pivoted from its turned over position back into its position turned toward the covering bow.
Preferably, the articulation of the auxiliary bow is provided on a frame section connected to the front carriage, so that the distance to the strut of the frontmost pair of carriages is increased and an overturning of the auxiliary bow is facilitated.
According to a preferred design, it is provided that, between the strut and the auxiliary bow, a second pretensioning member is arranged, which pretensions the auxiliary bow against its closing direction. The second pretensioning member ensures that the auxiliary bow is pulled in the direction of its turned over position, wherein the weight of the auxiliary bow and the weight of the covering bow connected by the auxiliary bow connected via the first pretensioning member tension the second pretensioning member. Due to this configuration, together with the friction which prevents a pivoting movement in the articulations of the auxiliary bow and of the covering bow and which is preferably adjustable, for example, by adjustable screwing or inserted plates, it is achieved that the system consisting of auxiliary bow and covering bow always remains in the position in which it was moved by the axial movement of the movable parts of the folding-top frame along the guide. Hereby, the covering bow is advantageously prevented from falling by its own weight onto the understructure or the frame section when shaking occurs.
Preferably, the second pretensioning member is selected from the group comprising a tension spring, a pulling strap, an elastic belt, an elastic web or tarpaulin or a combination thereof. The group also comprises additional elastic means which can assume the function of a pretensioning member.
According to a preferred design, it is provided that the second pretensioning member is connected at both ends to the frontmost strut and that a central area of the second pretensioning member is placed around the auxiliary bow. Thereby, it is ensured that the second pretensioning member is not fully untensioned even when the auxiliary bow leans against the frontmost strut, so that a residual tension remains. In this case, the pretensioning member is designed, for example, as an elastic belt which already has sufficient tension between its two ends to prevent relaxing when the auxiliary bow is pulled up.
In contrast thereto, when the covering bow is also in a turned over position leaning against the auxiliary bow and against the strut, the first pretensioning member is largely untensioned, so that, when the auxiliary bow is pivoted up, the second pretensioning member is tensioned more strongly than the first pretensioning member.
Preferably, the pretensioning members at least partially, preferably mostly, compensate for the torque generated by the weight of the covering bow, so that less force needs to be applied for the movement of the covering bow. Accordingly, the actuation rod connected to the lateral arm of the covering bow can be designed to be short, in any case shorter than the length of the lateral arm of the covering bow, without the load resulting from the transmission ratio and the difference in weight inhibiting the pulling up of the movable parts of the folding-top frame.
According to an aspect of the invention, a tarpaulin structure for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, is created, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts which have, on the ends, in each case a carriage that is displaceable along a guide. Here, at least one bow is pivotally connected either to the pair of opposite carriages of the strut or to the strut itself, wherein the bow forms a part of a tarpaulin folding aid together with a pivotable bow of an adjacent strut or of a pair of opposite carriages or of a stationary part of the folding-top frame, wherein the tarpaulin folding aid can but does not have to contain a kinematic connecting rod assembly connecting the bows to one another. A covering bow is pivotally connected to the frontmost pair of carriages, wherein the covering bow comprises an extension which can be pivoted together with the covering bow around its articulation. Here it is provided moreover that the extension can be pivoted via a connecting rod transmission for the pivoting of the covering bow into one of its two end positions, that is to say a pivoted-down position or a pivoted-up position. Thereby, the covering bow can be pivoted completely from an end position into the other end position, wherein the connecting rod transmission can convert the relative movement of the folding-top frame along the guide into a pivoting movement of the covering bow. This simplifies the actuation of the folding-top frame, and, as a result, the covering bow can be designed simply, since only the frontmost carriage has to be moved along the guide. The axial shifting movement of the carriage is advantageously converted by the connecting rod transmission into a pivoting movement of the covering bow, so that it is simple to operate the folding-top frame from the support plane of the understructure. At the same time, the pivoting up movement of the covering bow is kinematically connected with the opening movement of the tarpaulin structure, and accordingly the pivoting up movement of the covering bow is kinematically connected with the closing movement of the tarpaulin structure, so that the tarpaulin structure can be operated easily by a user.
The arrangement of the covering bow on the frame section makes it possible to dispense with providing the covering bow itself with rollers that can be moved along the guide, so that malfunctioning cannot occur here when the covering bow has been deformed to some extent from outside by the operating person, by the load or due to damage. In addition, the covering bow is uncoupled from the guide and from the understructure and can be locked directly to the carriage or to a frame section of the carriage.
Advantageously, the connecting rod transmission comprises an actuation rod and an intermediate connecting rod which are coupled to one another and which contribute to the pivoting of the covering bow. It is possible to integrate additional connecting rods and levers in the connecting rod transmission, for example, when an articulation is replaced by an assembly having multiple articulations.
Advantageously, at least one of the articulations of the connecting rod transmission is additionally guided in an oblong hole-type sliding track, so that a deflection of the parts of the connecting rod transmission in lateral direction is prevented. For this purpose, the articulation area is designed in the manner of a support roller with lateral flanges that are braced against lateral drift in the sliding track which is preferably in the shape of an arc of a circle.
The intermediate connecting rod is here coupled in each case by articulation to the extension and to the actuation rod, so that a pivoting movement of the actuation rod results in a pivoting movement of the intermediate connecting rod, which in turn drives the covering bow via the extension.
Preferably, a articulation of the actuation rod is located in front of the articulation of the covering bow, i.e., farther from the strut of the frontmost carriage than the articulation of the covering bow. Thereby, an advantageous lever arm of the actuation rod can be achieved. In particular, in this way, a relatively small force in the case of a relatively long path for the pivoting of the actuation rod is achieved, so that the force required for the pivoting of the covering connecting rod is not likely to block the movement of the folding-top frame.
Advantageously, the actuation rod has a bent end section which, with a deflection member such as, for example, a roller, arranged on the guide or the understructure, brings about at least one of the pivoting up movement and the pivoting down movement of the covering bow. Here, a first roller can bring about the pivoting up movement of the covering bow, while a second roller, which works together with the shifted actuation rod, brings about the pivoting down movement of the covering bow. For this purpose, when the covering bow is open, the actuation rod is arranged approximately in the plane of a frame section extending the frontmost carriage, so that the end of the actuation rod which then faces forward can come in contact with the deflecting member. The convex side of the bent end section in the process preferably moves in the pivoting down direction, while the concave side of the bent end section moves in the pivoting up direction when the corresponding side engages with the deflection member.
Here, advantageously, the connecting rod transmission allows a partial pivoting up of the covering bow when the understructure is tipped, so that the understructure can be designed as a tipping trough from which the contained load can be discharged through a trough flap which can be pivoted up. However, at the same time the connecting rod transmission can limit the maximum angle that the covering bow can pivot away from the understructure, so that an angle of only approximately 30°, but not more, between understructure and covering bow is possible. However, for this purpose, a separate hook is preferably provided, which is arranged outside of the connecting rod transmission; on the other hand, the locking can also occur on mutually pivotable parts of the connecting rod transmission.
According to an advantageous design, it is provided that the covering bow includes in each case an extension on the two longitudinal sides of the folding-top frame or its articulation, said extension being pivotable together with the covering bow around its articulation, and that each of the extensions can be pivoted in each case via its own connecting rod transmission for the pivoting of the covering bow into one of its end positions. The two connecting rod transmissions are then advantageously in a mirror image arrangement with respect to a plane which bisects the tarpaulin structure longitudinally. Thereby it is advantageously achieved that the pivoting up movement of the covering bow occurs approximately evenly from the two arms articulated to the carriage, resulting in a symmetric loading of the covering bow and an even folding of the tarpaulin.
According to a preferred embodiment, it is provided that the connecting rod transmission is controlled on one side of the folding-top frame for the pivoting up of the covering bow and that the opposite connecting rod transmission is controlled on the other side of the folding-top frame for the pivoting down of the covering bow. Thereby, it is advantageously achieved that the connecting rods of the connecting rod transmission can run over a large pivoting angle without colliding in the process with the additional deflection member, since on each of the two sides in each case only one deflection member is provided for the deflection on one or on the other side. Advantageously, the deflection members are here spaced apart in longitudinal direction of the guide by a distance which is greater than the length of the actuation rod, so that a simultaneous engagement of the actuation rod with the two deflection members is prevented.
Advantageously, the guide moreover includes an abutment for the maximum movement forward of the frontmost carriage, that is to say in closing direction, whereby the carriage is prevented from moving past the end of the guide or past the position intended for it when the tarpaulin structure is closed.
The articulation of the covering bow very far forward advantageously makes it possible for the covering bow to have a very short distance between articulation and its base connected to the articulation via arms, so that the height necessary for pivoting the covering bow can be small.
According to an aspect of the invention, a tarpaulin structure for an understructure, such as a truck, trailer, semi-trailer, railway car, dump truck or container, is created, comprising a folding-top frame and a tarpaulin made of weather-resistant material, wherein the folding-top frame has a plurality of struts which have, on the ends, in each case a carriage that is movable along a guide, wherein at least one covering bow is pivotally connected to the frontmost pair of carriages. Here, the covering bow can be locked to the frontmost carriage via a pivotable hook. By means of the locking of the covering bow to the frontmost carriage, in particular to a frame section protruding from the frontmost carriage, which can be moved only in the longitudinal direction of the guide, a possibility of fastening the tarpaulin to the understructure is advantageously created, without at the same time having to lock the covering bow to the understructure. Thus, an advantageous uncoupling of the locking, on the one hand, of the carriage to the guide and thus to the understructure, and, on the other hand, of the covering bow to the carriage occurs.
The hook can selectively be pivotally connected via at least one articulation to the covering bow, or else the hook can be connected via at least one articulation to the frontmost carriage. In both cases, the hook then advantageously engages with a counter-bearing which is arranged on the respective other part, so that a positive locking of the two mentioned parts occurs. A particular advantage of the provision of a hook consists in that, when the understructure is pivoted, for example, in the case of a dump truck that has to be emptied, the hook can release the lock, whereby the covering bow can pivot upward to some extent. This is advantageous, since the articulation of a trough flap which is articulated in the upper area of the trough at the rear end, requires a free space for its pivoting, space which is covered by the covering bow in the closed state of the tarpaulin structure. As a result of the pivoting down of the covering bow, when the trough is tipped, the free space necessary for the movement of the trough flap is thereby cleared, in that the hook pivots out of engagement with the counter-bearing, without a part of the folding-top frame having to be axially shifted along the guide for this purpose. If the trough is again moved into the horizontal position, the hook again pivots into engagement with the counter-bearing, so that the hook pivots due to its own weight back into a locked position.
Advantageously, the hook has an abutment surface which makes it possible for the hook to be knocked free out of its locked position, so that the hook then too disengages the covering bow and frontmost carriage when the movable parts of the tarpaulin structure are moved for the opening of the tarpaulin structure. The abutment surface then advantageously strikes an abutment member provided on the understructure or on the guide or close to the guide, whereby the hook is pivoted around its at least one pivot axis and thus releases the covering bow from the frontmost carriage. For this purpose, the abutment member is positioned so that, when the tarpaulin structure is opened, the abutment surface can be moved against the abutment member. The abutment surface and the hook then slide during the opening over the abutment member and enable the covering bow, during the opening of the movable parts of the tarpaulin structure, to be pivoted from its pivoted-down position into a pivoted-up position. Advantageously, the axis of the at least one articulation of the hook is arranged parallel to the pivot axis of the covering bow, so that the parts can advantageously be coordinated functionally with one another.
Advantageously, the hook has a guide surface which enables a lifting of the hook from its lowered position, wherein the guide surface works together with the abutment member so that, when the tarpaulin structure is closed, due to the movement of the movable parts of the tarpaulin structure along the guide, the hook can run over the abutment member. Thereby, it is advantageously ensured that hook and abutment member do not block one another during the closing of the tarpaulin structure, and a particular intervention for the release is not necessary. During the closing of the tarpaulin structure as well, the hook pivots around its articulated linkage, wherein the pivot direction is preferably opposite from the direction in which the hook is pivoted when it is knocked free out of its locked position.
According to a preferred design, it is provided that the hook is pivotally connected to the frontmost carriage or to a frame section forming a single component with the frontmost carriage, said frame section being arranged above the guide in a horizontal plane, wherein it is possible to consider using a pivoting around a single articulation as well as around an arrangement with multiple articulations. Here, the center of gravity of the hook is preferably provided below its articulation, so that, when the understructure is pivoted, the center of gravity is made to perform a pivoting movement which pivots away from the counter-bearing and thus out of engagement. The hook itself or the engagement protrusions assuming the hook function is/are then arranged on the side opposite from the center of gravity with respect to the articulation.
According to an alternative design, it is provided that the hook is articulated to the covering bow and can be locked to the frame section which extends the frontmost carriage and is designed so as to form a single component with the frontmost carriage preferably above the guide in a horizontal plane. In this case, the center of gravity is preferably located on the side of the hook itself or of the engagement projection which engages with the counter-bearing, so that a pivoting is achieved when the understructure is tipped.
Preferably, the hook can be locked to a frame section which is arranged above the guide in a horizontal plane on the frontmost carriage. Moreover, it is advantageously provided that the hook can be pivoted into an unlocked position by pivoting the tarpaulin structure and/or the understructure. Furthermore, according to a preferred design, the hook has its center of gravity under its articulation on the covering bow or on the frontmost carriage or the frame section.
In an advantageous development, it is provided that the hook is pivotally connected to one of covering bow and foremost carriage via at least one articulation, wherein, in a further improvement, it is provided that, on the other one of cover bow and frontmost carriage, a counter-bearing designed in particular as a bolt section is arranged. Here, due to the hook and the counter-bearing which together advantageously form a positive-locking connection, the pivoted-down covering bow and the frontmost carriage are locked to one another. Advantageously, the counter-bearing designed as bolt section is arranged on an end of the frontmost carriage, so that the hook can be arranged in the same vertical plane on the covering bow. In order to grip the bolt section from behind, a recess is advantageously provided between the bolt section and the rest of the carriage.
A particularly preferred design results when the hook has several engagement projections, since in that case each of the engagement projections of the hook enables a locking to the counter-bearing. Thereby, a tolerance can be compensated when the covering bow is pivoted down, in that, in that case, several engagement projections arranged under each other can engage with the counter-bearing, and, accordingly a locking is achieved even when due to the load or mechanical deformations of the interacting parts, the parts can no longer be moved together completely.
Advantageously, the hook also has a guide section which ensures that when, due to its weight, the hook strikes the counter-bearing with an external side turned away from the engagement projection, the hook is pivoted past the counter-bearing in such a manner that the counter-bearing can subsequently engage with one of the engagement projections.
Preferably, the hook is kinematically coupled to a trough flap or to another movable part of the understructure, for example, via a tension rope which can also be deflected, a connecting rod or also a drive. Thereby, it is ensured that the pivoting movement of the movable part of the understructure is transmitted to the hook and accordingly the hook is disengaged.
According to a preferred design, it is provided that the front pair of carriages is connected together by a strut and by the covering bow, so that the mentioned parts form a portal which can be moved substantially without tilting along the guide. Thereby, the frontmost carriage can be used for the introduction of the shifting movement which is then transmitted to the additional carriages.
Advantageously, the covering bow is connected to the tarpaulin, so that the pivoting down movement of the covering bow entirely tensions the tarpaulin which is connected to the additional struts and bows and thus ensures that the carriages are arranged with the struts in the position intended for them. For this purpose, the t
ترجمة - عربي ظ‡ظٹظƒظ„ طھط±ط¨ظˆظ„ظٹظ†
tarpaulin structure
ط§ظ„ظˆطµظپ ط§ظ„ظƒط§ظ…ظ„
عربي إلى أنجليزي: Ar-Eng Feasibility Study - sample General field: الأعمال/المال Detailed field: المحاسبة
لغة نص المصدر - عربي 2. هدف المشروع:
الهدف من المشروع هو إعادة تفعيل اللجنة بأدوارها ومسؤولياتها المناسبة إضافة إلى إنشاء أمانة لهذه اللجنة. هذا المستند يحتوي على تفاصيل المشروع وخارطة الطريق المقترحة.
3. نطاق العمل:
أدناه موجز للأنشطة المحددة والمخرجات المطلوبة من هذا المشروع
تطوير عملية صياغة الاستراتيجية والسياسية بشكل واضح وشامل، مع تقديم مخرجات واضحة بشأن ما يلي
• إنشاء دليل، يتألف من إجراءات وتعريفات لصياغة السياسات العامة
oيجب أن يتألف الدليل من إجراءات واضحة ومفصلة حول كيفية صياغة السياسة
• مراجعة نموذج الحوكمة الحالي للجنة وعضويتها
• مراجعة أدوار ومسؤوليات اللجنة
• إنشاء لجنة استشارية، تتكون من نخبة الخبراء مختصين في مجال الاقتصاد وصياغة السياسات العامة )محليين والدوليين(
• إنشاء أمانة للجنة تحت مظلة وزارة الاقتصاد والتخطيط
• إجراء جميع العمليات المطلوبة للأمانة، بما في ذلك تحديد المجموعة الأساسية للسياسات العامة، مع الأخذ في الاعتبار التحليل التجريبي المطلوب لوضع السياسات، وتقديم مسودة أولية للسياسات العامة
• الدعم في تحديد واختيار المنظمات الدولية والمعاهد) Think Tanks( المحتمل التعاون معهم في تبادل المعارف وأفضل الممارسات في مجال السياسة العامة.
• تحديد مواضيع القطاع العام ذات الأولوية التي تحتاج إلى عناية فورية، وعملية تحديد الأولويات للمستقبل.
• تحديد المكاسب السريعة وعوامل التمكين الرئيسية والنتائج المتوقعة الناجحة على المدى الطويل
• إجراء عمليات تجريبية على قرارات وعمليات اللجنة الوطنية للسياسات العامة الحاسمة بحيث يتم تنفيذ أدلة الإجراءات. وتشمل الوثائق الرئيسية التي يتطلب استخدامها أدلة الإجراءات والعمليات
تمكين نشر السياسة ودورات المراجعة
• تحديد المخاطر المحتملة لنشر السياسة وإعداد استراتيجية لتخفيف أثر كل سياسة معدة
• إنشاء آليات لمراجعة وتحديث السياسات
• إجراء جلسات منتظمة لأخذ ردود فعل أصحاب المصلحة من أجل تحديد وحل قضايا نشر سياسة معينة
• التأكد من أن عمليات نشر السياسات ترتبط باستراتيجية اتصال محددة )مثال، مراسلات واستراتيجية الاتصال(
• التسليم للعميل الآليات اللازمة لمراجعة السياسة في المستقبل
ترجمة - أنجليزي 2-Project objective:
The project objective is to reactivate the committee with its appropriate roles and responsibilities as well as establishing a secretariat therefore. This document sets the project details and the proposed road map.
3- Scope of Work:
The specific activities and the required outputs of the project are summarized as follows:
Developing the strategy and policy drafting process in a clear-cut and comprehensive manner and providing clear outputs for the following:
• Drafting a manual consisting of procedures and definitions for the public policy drafting.
• The manual must consist of clear and detailed procedures on the adopted method in the policy drafting.
• Reviewing the current governance model of the committee and its membership
• Reviewing the roles and responsibilities of the committee.
• Forming an advisory committee consisting of highly qualified economists and policy drafters (on the local and international levels).
• Forming a committee secretariat under the umbrella of the Ministry of Economy and Planning.
• Conducting all the required operations of the secretariat, including the identification of the basic group of the public policies, taking into account the empirical analysis required for policy development, and the provision of a preliminary draft of the public policies.
• Supporting the identification and selection process of international organizations and institutes (Think Tanks) of a potential cooperation in the exchange of knowledge and best practices concerning the public policies.
• Identifying public sector priority topics requiring immediate attention and future prioritization.
• Identifying the quick gains, key enabling factors and successful long-term expected results.
• Performing pilot exercises concerning the decisive decisions and operations of the Public Policies National Committee, so that the manuals of the procedures are enforced. The main documents to be used include the procedures and operations manuals.
Allowing the Policy Publication and Reviewing Cycles
• Identifying potential risks of the policy publication and developing a strategy to mitigate the impact of each developed policy.
• Establishing mechanisms to review and update the policies.
• Holding regular feedback sessions to get familiar with the concerned parties reactions in order to identify and resolve the particular policy publication-related issues.
• Ensuring that policy publications linked to a defined communication strategy (e.g. the correspondences and communication strategy).
• Delivering the necessary mechanisms to the customer to review the policy in the future.
أنجليزي إلى عربي: Plant Patent General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: علم النبات
لغة نص المصدر - أنجليزي Pineapple plant named `Rose`
Inventors: Firoozbady; Ebrahim (Coral Gables, FL), Young; Thomas R (Coral Gables, FL)
Applicant: DEL MONTE INTERNATIONAL GmbH
Abstract
A new pineapple (Ananascomosus) variety of the Bromeliaceae family was developed, via genetic engineering of MD2, named `Rose` is provided. Internal light red color with yellow spots, unique shell morphology and possibility of flowering control trait are traits of the new variety.
DESCRIPTION
Species name: Ananascomosus.
Variety denomination: `Rose`, with breeder name `EF2-114`.
BACKGROUND OF THE INVENTION
There is a continuous need for production of novel varieties of pineapple with distinct color, higher carotenoid content and flowering tolerance trait.
SUMMARY OF THE INVENTION
A new variety of pineapple (Ananascomosus), family Bromeliaceae, has been developed using genetic engineering techniques and named `Rose` or international breeder name `EF2-114`. Using crown materials from variety MD2 (also known as Del Monte Gold pineapple) to produce in vitro shoot cultures, introduce genes and DNA elements into leaf base sections, regenerate complete plants, perform field trials and select plants with internal pink- or red-colored fruits. The selected plants were asexually propagated in the field and via meristem culture to confirm the color and other traits related to fruit and agronomic performance. The invention relates to production of a new and distinct variety of the Bromeliaceae, or pineapple family.
The new plant variety `Rose` is characterized by light red flesh color (FIGS. 4 and 6) and "Tiger" shell color, when compared with the parental line, MD2, and it might be tolerant to natural occurrence of flowering. Internal color of fruits can be variable for intensity of the light red color depending on the stage of ripening. The Tiger trait is defined as the color in shell has in the shoulder of each fruitlet a combination of colors green, yellow, orange and red due to expression of carotenoid genes in the shell (FIGS. 5-7). The plant morphology generally is the same as MD2, the parental plant (FIGS. 8-11).
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
FIG. 1. Enzymes and genes in the carotenoid biosynthesis pathway in plants and algae. (Adapted from J. Hirschberg et al., Pure & Appl. Chem. 69(10):2151-58). Genes used in pineapple transformations to create `Rose` are shown in the boxes. Psy is phytoene synthase gene from tangerine and b-lyc and e-Lyc are partial sequences of pineapple lycopene .beta.-cyclase and lycopene .epsilon.-cyclase genes respectively.
FIG. 2. Map of plasmid binary vector backbone, pHCW1, used for genetic engineering of pineapple. For definition of genetic elements see Table 1. RB--Right Border pVS1--Agrobacterium origin of replication TetR/A--Tetracyclin gene (bacterial selectable marker) pACYC--Bacterial origin of replication LB--Left Border
FIG. 3. Plasmid pHCW1 was used to create pHCW.T-7 binary vector (in AG76) and pHCWflACC3'-2 binary vector (in AG62). For definition of genetic elements see Table 2 and 3. Vector Backbone: RB: Right T-DNA Border pVS1: Agrobacterium origin of replication TetR/A: Tetracyclin gene (bacterial selectable marker) pACYC: Bacterial origin of replication LB: Left T-DNA Border T-DNA ALS cassette: EHS-Ubp (promoter)-ALS-ALS3' terminator Psycasssette: BRIP (promoter)-Psy-Ubp terminator bLyc cassette: BRIP (promoter)-bLyc(+)-LS1 intron-bLyc(-)-Ubp terminator eLyc cassette: BRIP (promoter)-eLyc(+)-LS1 intron-eLyc(-)-Ubp terminator flACS cassette: Ubp(promoter)-flACS(+)-LS1 intron-flACS(-)-Ubp terminator
FIG. 4. Event EF2-114 fruit (right) exhibits light red color in the flesh due to accumulation of lycopene while parental variety MD2 (left) has a golden flesh color.
FIG. 5. Shows "Tiger" shell color in `Rose` fruits. The color in shell has in the shoulder of each fruitlet a combination of colors green, yellow, orange and red.
FIG. 6. A "Tiger" fruit showing shell and internal color at harvest.
FIG. 7. Shows an immature fruit of `Rose` with Tiger shell morphology (left) and an immature fruit of MD2 (right) both .about.145 days after forcing.
FIG. 8. Shows overhead view of `Rose` plant.
FIG. 9. Shows a `Rose` plantation.
FIG. 10. Shows `Rose` (left) and MD2 (right) experimental plots.
FIG. 11. Shows `Rose` (left) and MD2 (right) meristem culture-derived plants. After 15 weeks growth in greenhouse, .about.15 cm long plants were transplanted in pots, and the pictures were taken 11 months later.
FIG. 12. Pineapple plant morphology.
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
A new variety of pineapple (Ananascomosus), family Bromeliaceae, has been developed using genetic engineering techniques and named `Rose`. This process took 6 years; started in August 2005, using crown materials from variety MD2 (also known as Del Monte Gold pineapple) that is not patented, imported from Hawaii, to produce in vitro shoot cultures, introduce genes and DNA elements into leaf base sections, regenerate complete plants, perform field trials and select plants with internal pink- or red-colored fruits. The selected plants were asexually propagated in the field and via meristem culture to confirm the colored traits and other traits related to fruit and agronomic performance. Testing and selection of four consecutive asexual generations took place from 2010 through 2014, in Costa Rica-Central America. During the field trials six groups of plants exhibited light red internal color. Molecular analyses confirmed that all of the groups are one transgenic event and collectively are referred as `Rose` pineapple variety. The new variety transmits the new traits from one generation to the next through asexual propagation using different propagules including use of ratoon, slips, ground sucker, hapa, stem sectioning and crown.
The `Rose` plant is very similar to parental line, MD2, for plant and fruit characteristics and fruit internal quality. However, in `Rose` the internal flesh color is light red with yellow spots, due to accumulation of lycopene in the edible part of fruit, the shell morphology is unique and referred as "Tiger" and it might be tolerant to natural occurrence of flowering. The tolerance to natural flowering has not yet been demonstrated for `Rose`. On the other hand, the parental variety, MD2, produces fruits with yellow flesh color only, does not produce the shell morphology "Tiger" and is sensitive to natural flowering.
The new variety `Rose` is best suited for the fresh market and residual fruit may be processed as juice or frozen product. The residual fruits are those not qualified for export (import to the USA). These fruits have cosmetic bruises or damages, or their crowns are deformed.
The main objective of this invention was to produce a unique and differentiated variety of pineapple by accumulation of high levels of carotenoids, in particular lycopene that produces red internal color while retaining most of the characteristics of the parental line, MD2. Essentially, carotenoid genes and flowering control gene were added to parental variety MD2 to produce `Rose` pineapple variety, which has novel traits such as light red flesh, new shell morphology and maybe flowering control trait.
The invention relates to carotenoid biosynthesis in pineapple plants. More specifically, this novel pineapple was produced by genetically transforming MD2 cells in tissue culture and regenerating complete plants. Transformation was accomplished with expression regulators that modulate lycopene biosynthesis in the internal section of the fruit as well as genes involved in ethylene biosynthesis pathway to control flowering in the plants.
Carotenoids are isoprenoid molecules that are widespread in nature and can occur as pigments in fruits, flowers, birds, and crustaceans. Animals are unable to synthesize carotenoids de novo, and rely upon the diet as a source of these compounds. Carotenoids may contribute fundamentally to human health and in recent years there has been considerable interest in dietary carotenoids with respect to their potential in alleviating age-related diseases in humans. This attention has been mirrored by significant advances in cloning most of the carotenoid genes and in the genetic manipulation of crop plants with the intention of increasing levels in the diet.
In plants, carotenoids are essential components of the photosynthetic apparatus and are responsible for the red, orange, and yellow color of many flowers and fruit. Our understanding of carotenoid biosynthesis has advanced dramatically in recent years (Hirschberg, 2001; Fraser and Bramley, 2004). The pathway involves a series of desaturations, cyclizations, hydroxylations, and epoxidations commencing with the formulation of phytoene (See FIG. 1). A subsequent series of desaturations is responsible for lycopene synthesis. After the desaturation reactions, the cyclization of lycopene is catalyzed by two enzymes, the beta-cyclase and the zeta-cyclase, leading to the formation of beta-carotene (two beta-rings) and alpha-carotene (one beta-ring and one zeta-ring) (Cunnigham et al., 1996, 1998).
The genes of interest are derived from edible plant species, pineapple (Ananascomosus) or tangerine (Citrus unshiu). Specifically, a tangerine phytoene synthase gene (Psy) (Ikoma et al, 2001) is under transcriptional control of the pineapple bromelain inhibitor (BRI) gene. We have also suppressed endogenous lycopene .beta.-cyclase (b-Lyc) and/or lycopene .epsilon.-cyclase (e-Lyc) gene expression using RNA interference (RNAi) technology in order to increase accumulation of lycopene in edible tissues of pineapple fruit (Young and Firoozabady 2010, U.S. Pat. No. 7,663,021). We constructed sense- and antisense-oriented sequences of the b-Lyc and e-Lyc genes derived from pineapple, which are separated by an intron of the light-inducible tissue-specific LS1 gene derived from potato (Solanum tuberosum) to form a hairpin structure. These genes are under transcriptional control of the Bromelain inhibitor gene promoter, which drives strong fruit-enhanced expression of the RNAi construct (Firoozabady, E. and Wintz, H-C 2005 and Wintz H-C and Firoozabady, E. 2011).
Flower initiation in pineapple can occur naturally primarily due to cool temperatures and short days. Natural flowering of pineapple plants is a major industry problem. To achieve the controlled flowering trait, we have altered expression of genes involved in ethylene biosynthesis. Ethylene is a plant hormone that plays an important role in every phase of plant development, including seed germination, fruit ripening, leaf and flower senescence, and abscission. In plants, ethylene is synthesized from the amino acid, Methionine. The immediate precursor of ethylene in higher plants is 1-aminocyclopropane-1 carboxylic acid (ACC) (Adams and Yang, 1979).
Ethylene is known to inhibit flowering in most plants. In mango and pineapple, ethylene promotes flowering (Burg S.P and Burg E.A. 1966). Ethylene, ethylene producing compounds and auxins have been used to induce flowering in commercial pineapple production (Turnbull et al., 1993).
We isolated a meristem-specific ACC synthase (flACCS) gene from pineapple and constructed sense- and antisense oriented sequences of the ACC synthase gene, which are separated by an intron of the light-inducible tissue-specific LS1 gene derived from potato (Solanum tuberosum) to form a hairpin structure for RNAi suppression of endogenous ACC synthase. The RNAi construct is under transcriptional control of the meristem-specific ACC promoter derived from pineapple.
Transformation method
Pineapple was transformed by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of organogenic tissues using a method described by Firoozabady (Firoozabady, 2011 U.S. Pat. No. 8,049,067). To achieve both high-carotenoid and controlled flowering phenotypes, Agrobacterium strains containing either a transformation plasmid for increased carotenoid biosynthesis (accumulation) or for decreased ethylene biosynthesis were co-cultivated with recipient pineapple tissues. Putative transformed tissues were selected on media containing chlorsulfuron and subsequently screened for the presence of target genes by PCR.
A. tumefaciens, [Strain GV3101] (Koncz and Schell, 1986), is a disarmed Agrobacterium strain commonly used for the delivery of T-DNA into plant cells. Different genes were inserted into T-DNA in a binary vector (see FIG. 2) for introduction to pineapple. The Psy derived from Citrus unshiu, tangerine (Ikomaa et al, 2001), encodes an enzyme that converts geranylgeranyl pyrophosphate (GGPP) to cis-phytoene, an intermediate in lycopene and beta-carotene biosynthesis.
The lycopene beta-cyclase gene (b-Lyc) derived from Ananascomosus, pineapple, encodes an enzyme that converts lycopene to gamma-carotene, a metabolic precursor of beta-carotene.
The lycopene epsilon-cyclase gene (e-Lyc) derived from Ananascomosus, pineapple, encodes an enzyme that converts lycopene to sigma-carotene, a metabolic precursor of alpha-carotene.
The modified acetolactate synthase (Chaleff, R. S., and Mauvais, C. J., 1984) (ALS) gene (surBHra) derived from Nicotiana tabacum, tobacco, catalyzes the biosynthesis of branched chain amino acids even in the presence of chlorsulfuron (Lee, K. et al., 1988), which allows for the selection of transformed pineapple cells.
Plasmid pHCW1 used for pineapple transformations was constructed by the laboratory of Del Monte Fresh Produce Company, Richmond, Calif. pHCW1 contains a tetracycline resistance gene (tetRA) from plasmid RP1 and the origin of replication from plasmid pACYC, which allows for selection and maintenance in Escherichia coli and the pVS1 replicon derived from Pseudomonas aeruginosa, which ensures replication in Agrobacterium tumefaciens. pHCW1 contains the 25-base pair sequences that delimit the T-DNA transfer and a 110-base pair synthetic sequence between the borders that forms multiple cloning restriction sites to allow integration of different T-DNA cassettes (see Table 1).
The plasmid pCHW1 was used to create pHCW.T-7 and pHCWflACC3'-2 binary vector plasmids. Binary vectors were transferred to disarmed A. tumefaciens strain GV3101. The GV3101 with pHCW.T-7 vector was named AG76 and the one with pHCWflACC3'-2 was named AG62 (see FIG. 3). AG76 and AG62 were mixed together and used for pineapple transformation. Genetic elements of the vectors are described in Tables 2 and 3.
Genetic engineering of the MD2 took place in the Laboratory of Del Monte Fresh Produce Company in Richmond, Calif., USA, where transgenic plants were produced and propagated in tissue culture. Then the propaguls were taken to the research area of Corporacion de Desarrollo Agricola Del Monte, S.A. (Pindeco), Buenos Aires-Puntarenas, Costa Rica, for field evaluation, propagation in the field and in the laboratory for mass propagation of the variety.
BOTANICAL DESCRIPTION OF THE PLANT
The description of the new variety is based on observations of well fertilized specimens which were grown under field conditions, in the Buenos Aires region, Costa Rica (9 degrees and 9 minutes latitude North, and 83 degrees and 20 minutes longitude west, 379 meters above the sea level), where temperatures generally range from 14.degree. C. to 37.degree. C., and annual rainfall averages 3251 mm.
The plants were grown at a research facility in Buenos Aires-Puntarenas, Costa Rica (Pindeco). Essentially, `Rose` is same as MD2 for all fruit and plant characteristics with the exception of fruit internal color, Tiger trait and possibly flowering control trait (Tables 4-10). The Munsell Color Chart was used for all color designations ("Munsell Book of Color" GretagMacneth LLC, 617 Little Britain Road, New Windsor, N.Y. 12553-6148). Name: Ananascomosus (L.) Merr. Var. `Rose`, family Bromeliaceae, subclass Monocotyledons. Parentage: `MD2` or `Del Monte Gold`. Origin: Genetic engineering of MD2 followed by selection in the field trials for the traits of interest. Classification: I. Botanic.--Bromeliaceae or pineapple family. Subfamily: Bromelioideae. Genus: Ananas. Subgenus: comosus. Variety: `Rose`, breeder name `EF2-114`. II. Commercial.--Bromeliad fruit plant. General form: `Rose` grows at a rate of 1.72.+-.0.02 mm per day (Table 7) until it reaches the anthesis stage, when the plant changes from vegetative growth to reproductive stage. This transition involves the formation of the flower meristem. Plant attitude is open, the plant height just before anthesis is 116.0.+-.1.0 cm with a stem height of 34.7.+-.0.5 cm and a D-leaf length of 97.6.+-.2.0 cm (Table 7). Foliage attitude consists of a compact rosette of overlapping sessile leaves arising from a central stem and surrounding a composite inflorescence prior to anthesis. Production of off shoots (suckers, hapas and slips) is very limited, but depending on season slips may vary from 0 to 2.0.+-.1 per plant. Stems: Stem is upright, covered by overlapping leaves arranged in acropetal fashion and is 34.7.+-.0.45 cm in length (Table 7). The stem color is grayish (7.5GY 7/1). Leaves: Leaves are sessile, lanceolate in form, elongated and succulent, with acuminate apex shape, forming a rosette with a 5/13 phyllotaxy. They are dark green (5GY 5/6 to 5/10) on the upper surface and light green (5GY 7/4 to 7/10) on the lower surface, with width at mid-leaf of 6-7 cm, spines only in tips (apex), with no anthocyanins accumulation and no variegation. Trichomes are present in the abaxial side of the leaves. Depending on growing conditions, the number of active leaves per plant may vary from 40 to 60. Inflorescence: In `Rose`, the number of days from the flower induction to the emergence of the cone (floral bud) is 35.+-.1 days, and 19.+-.1 additional days to the opening of the first flower. The number of days from first to last flower is 14.+-.0.4 days. It produces a total of 91.+-.1 flowers (Table 7). `Rose` inflorescence, just like MD2, is composite flowers, with self-incompatible individual bi-sexual flowers containing three sepals, three petals, six stamens, three stigmas, and three pistils (carpels). Disposition of anthers are grouped. Sepals are purple smooth (10P 3/4 to 3/8) in upper side and green (5GY 5/10 to 6/10) in lower side. Petal bases are free (not fused), petal color is white (10YR 8/1) at the base and deep purple (5RP 3/4 to 3/8) at the tip. Petals are imbricate. Flowers produce low number of pollen at the anthers and style is medium in length (same length as the stamens). Fruit: I. General.--After opening of the first flower, it takes 96.+-.2 days for the `Rose` fruit to develop and ripe. Fruit has distinct aromatic and with medium content of fiber. The fruitlets are flat in the center and bulky in the borders. II. Fruit shape.--The fruit shape is cylindrical. Its average weight is 1492.+-.24 g with a length of 15.7.+-.0.1 cm (crown not included), 12.8.+-.0.1 cm of diameter at base, 12.1.+-.0.1 cm of diameter at the middle portion and 11.4.+-.0.1 cm of diameter at the upper part. It has a core diameter of 2.7.+-.0.1 cm (Table 7). III. Fruit shell.--Color is dark green (5G 5/6 to 5/10) until 3-4 weeks before maturity, and then the shell produces "Tiger" color (FIG. 5). The Tiger trait is defined as the color in shell has in the shoulder of each fruitlet a combination of colors green (5G 7/6 to 7/10), yellow (5Y 7/6 to 7/10), orange (5YR 3/5 to 6/5) and red (5R 2/4 to 5/4) due to expression of carotenoid genes in the shell (FIGS. 5-7). Fruit shell color at point of consume is yellow/orange (2.5Y 8/8 to 7.5YR 7/10, FIG. 6). IV. Peduncle.--Fruit develops from the apical meristem of the plant on a short peduncle. At the fruit ripening stage, peduncle reaches a length of 17.0.+-.0.3 cm and diameter of 2.5.+-.0.3 cm (Table 7) and is green (5GY 4/6). Trichomes are present on peduncle. Imbricate bracts are present at the base of peduncle. The average length of the longest bract is 18.7.+-.6.2 cm. V. Crown.--The crown of `Rose` is conical in shape and similar to MD2 for weight and length (Table 9), and classified as long (>20 cm) and heavy (>130 g). Color of crown leaves is 5GY 6/4 to 8/4. VI. Flesh.--The flesh is characterized by having a firmness of 3.4.+-.0.1 g/N and succulence of 0.50.+-.0.01 ml/g (Table 7). Fruit flesh is firm and fibrous with acidity, Brix degrees and pH similar to those of MD2 (Table 4), however, there are statistically significant differences between the two varieties for nutrients such as lycopene; .beta.-carotene, vitamin C and potassium (see Table 5). The lycopene makes the flesh color light red (5R 7/6 to 7/8, 7.5R 7/6 to 7/8, 7.5R 6/6 to 6/8) with orange-yellow to golden yellow (2.5Y 8/8 to 8/10) spots. Number of spots can vary between 0 to 10 depending on the growing conditions. Minor differences between Rose and MD2 flesh were noted in certain other nutrient components (ash, carbohydrates, moisture, sucrose, vitamin C, and leucine) (Table 6), however, these differences are within the reported range of nutrients in pineapple varieties and are considered to be biologically insignificant within the context of the American diet. Plant/fruit resistance/susceptibility to pests and diseases: Resistance/susceptibility of Rose to Fusarium subglutinans and other pests and diseases are expected to be same as MD2 (see Morales et al. 2006 U.S. Pat. No. 16,328 for MD2 traits). Vegetative propagules: Commercial propagation is via vegetative propagules (suckers, stem shoots, hapa and slips and fruit crowns, FIG. 12). The `Rose` plant produces an average of 0.72.+-.0.06 slips (Table 7), 0.76.+-.0.02 ground suckers (low number), 0.90.+-.0.13 suckers (low number), and 0.40.+-.0.02 hapas (low number) (Table 8). Vigor: It is considered that the plant vigor is similar to MD2. Harvest: Under the Buenos Aires region, Costa Rica conditions, Plant crop is harvested 150-170 days after forcing depending on season (dry or rainy), Ratoon Crop is harvested 12 months after Plant Crop is harvested. Storage: Storage and post-harvest characteristics of Rose is expected to be same as MD2. Yield: Estimated yield is same as MD2, 120-125 MT/ha in Plant Crop and 95-100 MT/ha in Ratoon Crop. Market: Fruit will be designated to the international fruit market and commercialized into the fresh fruit market. Residual fruit (as defined in "DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION" section) may be processed as juice or frozen product.
Tables: Tables 4-10 compare Rose and MD2. Twenty-one quantitative characteristics measured in details for Rose and MD2 showed that there are no statistically significant differences between the two varieties for the 21 characteristics (Table 7). Also, detailed phenotypes measured for Rose and MD2 showed that among 17 traits only flesh color and shell color are significantly different in the two varieties (Table 8). Sensory analyses done for Rose and MD2 fruits showed that there are no statistically significant differences between the two varieties for all 11 attribute measured (Table 9 and 10).
CLAIMS
What is claimed is:
1. A new and distinct variety of pineapple plant named `Rose` as illustrated and described herein.
ترجمة - عربي نبات أناناس باسم "روز"
Pineapple plant named `Rose`
المخترعون: فيروزبادي; إبراهيم (كورال جابلز، إف إل)، يونج; توماس آر (كورال جابلز، إف إل)
مقدم الطلب: ديل مونتي إنترناشيونال جي إم بي إتش
الملخص
توفير صنف جديد من الأناناس (Ananas comosus) من العائلة البروميلية Bromeliaceae family تم تطويره من خلال الهندسة الوراثية لـ MD2 باسم "روز". يعد اللون الأحمر الفاتح المزود بالنقط الصفراء والشكل المميز للقشرة الخارجية وإمكانية التحكم في الإزهار flowering control عبارة عن سمات مميزة للصنف الجديد.
الوصف
اسم النوع: Ananas comosus.
فئة الصنف "روز" باسم المستنبط "EF2-114".
الخلفية العامة للاختراع
هناك حاجة مستمرة إلى إنتاج أصناف جديدة من الأناناس بلون مميز ومحتوى كاروتيني carotenoid عالي وخاصة تحمل الإزهار flowering tolerance.
ملخص الاختراع
تم تطوير صنف جديد من الأناناس (Ananas comosus) من العائلة البروميلية Bromeliaceae باستخدام أساليب الهندسة الوراثية باسم "روز" أو اسم المستنبط الدولي "EF2-114". باستخدام مواد تاجية crown materials من الصنف MD2 (التي تعرف أيضًا باسم أناناس Del Monte Gold) لإنتاج في المختبر مزارع إنبات واستحداث جينات وعناصر حامض نووي في المقاطع القاعدية للأوراق وإعادة توليد النباتات الكاملة وتنفيذ سمات حقلية وانتقاء النباتات ذات الثمار حمراء أو وردية اللون من الداخل. تكاثرت النباتات المختارة لاجنسيًا asexually في الحقل ومن خلال مزرعة نسيج نباتي قابل للتكاثر meristem culture للتأكيد على اللون وغيره من الخصائص المتعلقة بالثمرة والأداء الزراعي agronomic performance . يتعلق الاختراع بإنتاج صنف جديد ومميز من العائلة البروميلية Bromeliaceae أو عائلة الأناناس.
يتسم الصنف النباتي الجديد "روز" بلون الثمرة الأحمر الفاتح (الأشكال 4 و6) والقشرة الخارجية shell التي تتخذ لون "جلد النمر" "Tiger" shell color بالمقارنة مع السلالة الأبوية parental line MD2 وقد تتحمل ظاهرة الإزهار الطبيعية. قد يكون اللون الداخلي للثمرة متغيرًا من حيث كثافة اللون الأحمر الفاتح بناءً على مرحلة الإنضاج. توجد خاصية لون جلد النمر المحددة على أنها لون يظهر على القشرة الخارجية shell في جانب كل ثمرة صغيرة حيث تكون عبارة عن توليفة تجمع بين الألوان الأخضر والأصفر والبرتقالي والأحمر بسبب تعبير جينات الكاروتينات expression of carotenoid genes في القشرة (الأشكال من 5 إلى 7). يتطابق الشكل العام للنبات مع MD2، النبات الأبوي parental plant (الأشكال من 8 إلى 11).
وصف مختصر للرسومات
الشكل 1 الإنزيمات والجينات في مسار التخليق الحيوي biosynthesis للكاروتينات carotenoid في النباتات والطحالب. (متخذ من J. Hirschberg et al.، Pure & Appl. Chem. 69(10):2151-58). يتم توضيح الجينات المستخدمة في عمليات تحول الأناناس لإنشاء "روز" في المربعات. Psy هو عبارة عن جين سينثاز الفيتوين الذي يتم الحصول عليه من اليوسفي وb-lyc وe-Lyc عبارة عن متواليات جزئية من جينات ليكوبين الأناناس وبيتا سكلاز وليكوبين إبسيلون- سكلاز بالترتيب.
الشكل 2 عبارة عن مخطط لدعامة الناقل الثنائي للبلازميد، pHCW1، المستخدم في عمل الهندسة الوراثية للأناناس. لتعريف العوامل الجينية، انظر الجدول 1. RB--Right Border pVS1--منشأ Agrobacterium لتكاثر جين TetR/A--Tetracyclin (محدد بكتيري قابل للانتقاء) pACYC--المنشأ البكتيري لتكاثر LB--Left Border
الشكل 3 تم استخدام البلازميد pHCW1 لإنشاء الناقل الزوجي pHCW.T-7 (في AG76) والناقل الزوجي pHCWflACC3'-2 (في AG62). لتعريف العوامل الجينية، انظر الجداول 2 و3. دعامة الناقل RB: Right T-DNA Border pVS1: منشأ Agrobacterium لتكاثر TetR/A: جين Tetracyclin (محددي بكتيري قابل للانتقاء) pACYC: المنشأ البكتيري لتكاثر LB: مجموعة T-DNA Border T-DNA ALS اليسرى: مجموعة Psy لإنهاء EHS-Ubp (معزز)-ALS-ALS3: مجموعة bLyc لإنهاء BRIP (معزز)-Psy-Ubp: مجموعة eLyc لإنهاء BRIP (معزز)-bLyc(+)-LS1 intron-bLyc(-)-Ubp: مجموعة flACS لإنهاء BRIP (معزز)-eLyc(+)-LS1 intron-eLyc(-)-Ubp: إنهاء Ubp(معزز)-flACS(+)-LS1 intron-flACS(-)-Ubp
الشكل 4 يظهر على ثمرة EF2-114 (الجانب الأيمن) اللون الأحمر الفاتح بسبب تراكم الليكوبين lycopene بينما يظهر على الصنف الأبوي parental variety MD2 (الجانب الأيسر) لون الثمرة الذهبي.
الشكل 5 يبين القشرة الخارجية shell بلون "جلد النمر" في ثمار "روز". يظهر لون القشرة الخارجية shell في جانب جميع الثمار الصغيرة حيث تكون عبارة عن توليفة تجمع بين الألوان الأخضر والأصفر والبرتقالي والأحمر.
الشكل 6 ثمرة بلون "جلد النمر" تبين لون القشرة الخارجية shell واللب الداخلي عند الحصاد.
الشكل 7 يبين ثمرة "روز" `Rose` غير ناضجة بالشكل التركيبي للقشرة التي بلون النمر (الجانب الأيسر) وثمرة MD2 غير ناضجة immature (الجانب الأيمن حيث تم الحصول على كلاهما بعد مرور حوالي 145 يوم على الزراعة.
الشكل 8 يبين منظر علوي لنبات "روز" `Rose` .
الشكل 9 يبين زرع "روز" `Rose` .
الشكل 10 يبين المخططات التجريبية بخصوص "روز" `Rose` (الجانب الأيسر) وMD2 (الجانب الأيمن).
الشكل 11 يبين النباتات المشتقة من مزرعة نسيج نباتي قابل للتكاثر بخصوص "روز" `Rose` (الجانب الأيسر) وMD2 (الجانب الأيمن). بعد مرور 15 أسبوع من النمو داخل الصوبة الزراعية greenhouse ، وتم نقل نباتات بطوال حوالي 15 سم في أوعية pots وتم التقاط الصور بعد مرور 11 شهرًا.
الشكل 12 الشكل التركيبي لنبات الأناناس Pineapple plant morphology .
وصف تفصيلي للاختراع
تم تطوير سلالة جديدة من الأناناس (Ananas comosus) من العائلة البروميلية Bromeliaceae باستخدام أساليب الهندسة الوراثية genetic engineering باسم "روز" `Rose` . استغرقت هذه العملية 6 سنوات بدءًا من أغسطس 2005 باستخدام مواد تاجية من الصنف MD2 (التي تعرف أيضًا باسم أناناس Del Monte Gold)، غير الحاصلة على براءة اختراع والمستوردة من هاواي، لإنتاج في المختبر مزارع إنبات واستحداث جينات وعناصر حامض نووي في المقاطع القاعدية للأوراق وإعادة توليد النباتات الكاملة وتنفيذ سمات حقلية وانتقاء النباتات ذات الثمار حمراء أو وردية اللون من الداخل. تكاثرت النباتات المختارة لاجنسيًا في الحقل ومن خلال مزرعة نسيج نباتي قابل للتكاثر للتأكيد على السمات اللونية وغيرها من السمات المتعلقة بالثمرة والأداء الزراعي. تم عمل اختبار وانتقاء لأربعة أجيال لاجنسية متتالية بدءًا من 2010 وحتى 2014 في كوستاريكا، أمريكا الوسطى. أثناء عمل التجارب الحقلية، أظهرت ست مجموعات من النباتات اللون الأحمر الفاتح على اللب الداخلي. أكدت تحليلات الجزيئات أن جميع المجموعات عبارة عن حدث محور جينيًا واحد يشار إليهم بشكل جماعي باسم صنف أناناس "روز" `Rose` . ينقل الصنف الجديد السمات الجديدة من أحد الأجيال إلى الجيل الذي يليه عبر التكاثر اللاجنسي باستخدام أكياس مختلفة تتضمن العقر والقصاصات والماص الأرضي والحبيبات وأجزاء من الساق والتاج .
يشبه نبات "روز" `Rose` إلى حد كبير السلالة الأبوية، MD2، من حيث خصائص النبات والثمرة والنوعية الداخلية للثمرة. ولكن في "روز" `Rose` يكون لون الثمرة الداخلي أحمر فاتح به بقع صفراء اللون بسبب تراكم الليكوبين lycopene في الجزء الصالح للأكل من الثمرة ويكون الشكل التركيبي للقشرة الخارجيةshell مميز ويشار إليها باسم "جلد النمر" وقد تتحمل ظاهرة الإزهار الطبيعية. لم يثبت تحمل نبات "روز" `Rose` ظاهرة الإزهار الطبيعية حتى الآن. على الجانب الآخر، ينتج الصنف الأبوي، MD2، ثمارًا باللون الأصفر فقط ولا تنتج الشكل التركيبي "جلد النمر" للقشرة الخارجية وتكون حساسة لظاهرة الإزهار الطبيعية.
يتناسب الصنف الجديد "روز" `Rose` على نحو أفضل مع سوق الفاكهة الطازجة ويمكن تصنيع الفاكهة المتبقية وتحويلها إلى عصير أو منتج مجمد. تتمثل الفاكهة المتبقية في الفاكهة غير المؤهلة للتصدير (الاستيراد إلى الولايات المتحدة الأمريكية). تكون هذه الفاكهة معرضة لكدمات تؤثر على شكلها الجمالي أو أضرار أو تشوه في تاجها.
يتمثل الهدف الرئيسي من هذا الاختراع في إنتاج صنف مميز ومختلف من الأناناس بتراكم مستويات عالية من الكاروتينات، وخاصة الليكوبين lycopene الذي ينتج اللون الداخلي الأحمر مع الاحتفاظ بمعظم الخصائص المميزة للسلالة الأبوية MD2. وبشكل رئيسي، تضاف جينات الكاروتينات carotenoid وجين التحكم في الإزهار flowering control إلى الصنف الأبوي MD2 لإنتاج صنف "روز" `Rose` من الأناناس، الذي يحتوي على سمات جديدة مثل الثمرة ذات اللون الأحمر الفاتح وشكل تركيبي جديد للقشرة الخارجية مع إمكانية وجود سمة التحكم في الإزهار.
يتعلق الاختراع بالتخليق الحيوي biosynthesis للكاروتينات في نباتات الأناناس. وبشكل أكثر تحديدًا، تم إنتاج هذا الأناناس الجديد بتحول خلايا MD2 في مزرعة أنسجة وإعادة إنتاج نباتات كاملة. تم إنجاز عملية التحول من خلال منظمات للتعبير تقوم بتعديل التكوين الحيوي لمادة الليكوبين lycopene في الجزء الداخلي من الثمرة والجينات المشاركة أيضًا في مسار التكوين الحيوي للتحكم في الإزهار في النباتات.
الكاروتينات carotenoid عبارة عن جزيئات شبيهات الأيسوبرين المنتشرة في الطبيعة وقد توجد في شكل صبغات في الفاكهة والأزهار والطيور والقشريات. لا تتمكن الحيوانات من تخليق الكاروتينات carotenoid مجددًا وتعتمد على الغذاء كمصدر لهذه المركبات. من الممكن أن تسهم الكاروتينات carotenoid بشكل رئيسي في صحة الإنسان ويوجد في السنوات الأخيرة اهتمام كبير بالكاروتينات carotenoid الغذائية نظرًا لقدرتها على الحد من الأمراض المصاحبة للشيخوخة في الإنسان. ينعكس هذا الاهتمام بالتقدمات الكبيرة التي طرأت في مجال استنساخ معظم جينات الكاروتينات carotenoid وفي التعديل الجيني لنباتات المحاصيل بهدف زيادة المستويات في الغذاء.
في النباتات، تعد الكاروتينات carotenoid مكونات رئيسية في جهاز التخليق الضوئي وتكون مسؤولة عن ظهور اللون الأحمر والبرتقالي والأصفر على كثير من الأزهار والثمار. لقد قدم فهمنا للتخليق الحيوي للكاروتينات بدرجة كبيرة في السنوات الأخيرة (Hirschberg، 2001; Fraser and Bramley، 2004). يتضمن المسار مجموعة من عمليات إزالة الإشباع desaturation وتكوين الحلقات والمعالجة بالهيدروكسيل hydroxylations والفوق أكسدة epoxidations التي تبدأ بتكون جين الفيتوين formulation of phytoene (انظر الشكل 1). تكون مجموعة لاحقة من عمليات إزالة التشبع هي المسؤولة عن تخليق مادة الليكوبين lycopene . بعد تفاعلات إزالة التشبع desaturation ، يتم تحفيز تفاعل تكوين الحلقات لمادة الليكوبين lycopene بواسطة إنزيمين، بيتا- سكلاز beta-cyclase وزيتا- سكلاز zeta-cyclase ، بما يؤدي إلى تكون بيتا- كاروتين beta-carotene (حلقتي بيتا two beta-rings ) وألفا- كاروتين alpha-carotene (حلقة بيتا واحدة وحلقة زيتا واحدة one beta-ring and one zeta-ring ) ((Cunnigham et al.، 1996، 1998).
تُشتق الجينات ذات الاهتمام من أنواع النباتات الصالحة للأكل، الأناناس (Ananas comosus) أو اليوسفي (Citrus unshiu). وبشكل محدد، يخضع جين تخليق الفيتوين phytoene synthase gene الخاص باليوسفي (Psy) (Ikoma et al، 2001) إلى التحكم في النسخ transcriptional control الخاص بجين مثبط البروميلين في الأناناس pineapple bromelain inhibitor (BRI) .كما قمنا بمنع التعبير عن جين بيتا- سكلاز beta.-cyclase (b-Lyc) و/ أو ليكوبين إبسليون- سكلاز lycopene .epsilon.-cyclase (e-Lyc) باستخدام تقنية تدخل الحمض النووي الريبي (RNAi) من أجل زيادة تراكم مادة الليكوبين lycopene في الأنسجة الصالحة للأكل في ثمرة الأناناس للمخترع Young و Firoozabady عام 2000 ، وثيقة أمريكية رقم 7663021 . قمنا بإنشاء متواليات موجه للإحساس ومقاومة الإحساس من جينات b-Lyc وe-Lyc المشتقة من الأناناس حيث تم فصلها بواسطة إنترون جين LS1 الخاص بالنسيج المستحث بالضوء intron of the light-inducible tissue-specific LS1 gene المشتق من البطاطس (Solanum tuberosum) لتشكيل تركيب على هيئة دبوس شعر. تخضع هذه الجينات للتحكم في النسخ transcriptional control الخاص بمعزز جين مثبط البروميلين Bromelain inhibitor الذي يؤدي إلى وجود تعبير معزز للثمرة من تركيب RNAi (Firoozabady، E. and Wintz، H-C 2005 and Wintz H-C and Firoozabady، E. 2011).
يمكن البدء في عملية الإزهار في الأناناس طبيعيًا ويرجع السبب الرئيسي في ذلك إلى درجات الحرارة الباردة وفترات النهار القصيرة. يعد الإزهار الطبيعي في نباتات الأناناس مشكلة رئيسية في المجال. لتحقيق سمة الإزهار التي يمكن التحكم فيها، قمنا بتغيير تعبير الجينات المشاركة في عملية التخليق الحيوي biosynthesis لمادة الإيثيلين. يعد الإيثيلين هرمون نباتي يؤدي دورًا مهمًا في جميع مراحل نمو النبات بما في ذلك إنبات البذور وإنضاج الثمار وشيخوخة وانفصال الأوراق والأزهار. في النباتات، يتم تخليق الإيثيلين من الحمض الأميني amino acid ethylene ، الميثيونين Methionine . يتمثل البادئ المباشر للإيثلين precursor of ethylene في النباتات الأعلى في 1-أمينو سيكلو بروبان-1 حمض الكربوكسيل (ACC) (Adams and Yang، 1979).
يعرف عن الإيثيلين أنه يقوم بتثبيط الإزهار في معظم النباتات. في المانجو والأناناس، يعزز الإيثيلين ethylene عملية الإزهار (Burg S.P and Burg E.A. 1966). يستخدم الإيثلين والمركبات المنتجة للإيثلين وهرمونات الأكسين في تحفيز عملية الإزهار في إنتاج الأناناس التجاري (Turnbull et al.، 1993).
قمنا بعزل جين سينثاز ACC الخاص بالنسيج النباتي القابل للتكاثر (flACCS) من الأناناس وإنشاء متواليات موجه للإحساس ومقاومة الإحساس من جين سينثاز ACC، حيث تم فصلها بواسطة إنترون جين LS1 الخاص بالنسيج المستحث بالضوء المشتق من البطاطس (Solanum tuberosum) لتشكيل تركيب على هيئة دبوس شعر لتثبيط RNAi الخاص بسينثاز ACC باطني النمو. يخضع تركيب RNAi للتحكم في النسخ فيما يتعلق بمعزز ACC الخاص بالنسيج النباتي القابل للتكاثر المشتق من الأناناس.
طريقة التحول
تحول الأناناس من خلال التحول المتوسط بنوع Agrobacterium tumefaciens للأنسجة الجينية العضوية باستخدام الطريقة التي وصفها فيروزبادي ((Firoozabady وثيقة براءة الاخترا ع الأمريكية رقم ، 2011 U.S. Pat. No. 8،049،067). للحصول على أنماط ظاهرية من الكاروتينات carotenoid العالية والإزهار الذي يتم التحكم فيه، تمت زراعة سلالات Agrobacterium التي تحتوي على بلازميد حول لزيادة التخليق الحيوي biosynthesis لمركبات الكاروتينات carotenoid (التراكم) أو لخفض التخليق الحيوي biosynthesis للإيثلين مع سواغ يتمثل في أنسجة الأناناس. تم انتقاء الأنسجة المحولة بشكل افتراضي على وسيط يحتوي على كلورو سلفرون وتم فرزها بعد ذلك للتعرف على وجود الجينات المستهدفة بواسطة PCR.
tumefaciens، [سلالة GV3101] (Koncz and Schell، 1986)، هي عبارة عن سلالة Agrobacterium معطلة الفاعلية تستخدم بشكل شائع في توصيل T-DNA إلى خلايا النبات. تم إدخال جينات مختلفة إلى T-DNA في ناقل ثنائي (انظر الشكل 2) من أجل التقديم إلى الأناناس. يشفر Psy المشتق من Citrus unshiu، اليوسفي (Ikomaa et al، 2001)، إنزيم يحول بيروفوسفات الجيرانيل (GGPP) إلى سيس-الفيتوين، وهو مكون مباشر في عملية التخليق الحيوي biosynthesis لمادة الليكوبين lycopene وبيتا- كاروتين.
يشفر جين ليكوبين بيتا- سكلاز (b-Lyc) المشتق من Ananas comosus، الأناناس، إنزيم يحول الليكوبين lycopene إلى جاما- كاروتين، وهو بادئ أيضي لبيتا- كاروتين.
يشفر جين ليكوبين إيبسلون- سكلاز (e-Lyc) المشتق من Ananas comosus، الأناناس، إنزيم يحول الليكوبين lycopene إلى سيجما- كاروتين، وهو بادئ أيضي لألفا- كاروتين.
يحفز جين سينثاز أسيتولاكتات المعدل (ALS) (Chaleff، R. S.، and Mauvais، C. J.، 1984) (surBHra) المشتق من Nicotiana tabacum، التبغ، التخليق الحيوي biosynthesis للأحماض الأمينية ذات السلسلة المتشعبة حتى في ظل وجود كلورو سلفرون (Lee، K. et al.، 1988)، بما يسمح بانتقاء خلايا الأناناس المحولة.
تم إنشاء بلازميد pHCW1 المستخدم في إجراء عمليات التحول الخاصة بالأناناس من جانب مختبر شركة ديل مونتي فريش بروديوس، ريتشموند، كاليفورنيا. يحتوي pHCW1 على جين مقاوم لرباعي سيكلين (tetRA) الذي يتم الحصول عليه من بلازميد RP1 ويأتي منشأ النسخ من بلازميد pACYC، بما يسمح بالانتقاء والوقاية من الإشريشيا كولاي وريبليكون pVS1 المشتق من Pseudomonas aeruginosa، بما يضمن النسخ في Agrobacterium tumefaciens. يحتوي pHCW1 على 25 زوج من المتواليات القاعدية التي تمنع تقييد انتقال T-DNA و110 زوج من المتواليات التخليقية القاعدية بين الحدود التي تشكل مواقع مقيدة للاستنساخ للسماح بتكامل قوالب T-DNA المختلفة (انظر الجدول 1).
اُستخدم بلازميد pCHW1 في إنشاء بلازميدات الناقل الثنائي pHCW.T-7 وpHCWflACC3'-2. تم نقل النواقل الثنائية لإبطال مفعول سلالة A. tumefaciens GV3101. تمت تسمية GV3101 الذي يأتي مع الناقل pHCW.T-7 باسم AG76 والذي يأتي مع pHCWflACC3'-2 باسم AG62 (انظر الشكل 3). تم خلط AG76 وAG62 معًا واستخدامهما في إجراء تحول الأناناس. يتم وصف العناصر الجينية للنواقل في الجدولين 2 و3.
تمت الهندسة الوراثية لسلالة MD2 في مختبر شركة ديل مونتي فريش بروديوس، ريتشموند، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية، حيث تم إنتاج النباتات ذات الطفرات الجينية وتكاثرها في مزرعة أنسجة. تم سحب أكياس التكاثر بعد ذلك إلى منطقة الأبحاث التابعة لشركة كوربراسيون ديسارولو أكريكول ديل مونتي، إس أيه. (بينديكو) بوينس آيرس- بونتاريناس، كوستاريكا، لإجراء تقييم ميداني والتكاثر في الحقل وفي المختبر من أجل إجراء التكاثر الحجمي للفصيلة.
الوصف النباتي للنبات
يقوم وصف الصنف الجديد على ملاحظات العينات المخصبة جيدًا التي تمت زراعتها في ظل ظروف الحقل في منطقة بوينس آيرس، كوستاريكا (ارتفاع بمقدار 9 درجات و9 دقائق شمالًا، وارتفاع بمقدار 83 درجة 20 دقيقة شرقًا، 379 متر فوق مستوى البحر)، حيث تتراوح درجات الحرارة بكل عام من 14 درجة مئوية إلى 37 درجة مئوية ويكون متوسط تساقط الأمطار 3251 ملم.
تمت زراعة النباتات في منشأة بحثية في بوينس آيرس- بونتاريناس، كوستاريكا (بنديكو). تتطابق "روز" `Rose` بشكل رئيسي مع MD2 فيما يتعلق بجميع خصائص الثمار والنباتات باستثناء اللون الداخلي للثمار وخاصية لون جلد النمر واحتمال خاصية التحكم في الإزهار flowering control (الجداول من 4 إلى 10). تم استخدام مخطط ألوان مونسيل لتحديد جميع الألوان ("Munsell Book of Color" Gretag Macneth LLC، 617 Little Britain Road، New Windsor، N.Y. 12553-6148). الاسم: Ananas comosus (L.) Merr. الصنف "روز" `Rose` ، العائلة Bromeliaceae، الفئة الفرعية Monocotyledons. السلالة الأبوية parental line "MD2" أو "Del Monte Gold". المنشأ: إجراء هندسة وراثية على MD2 يعقبها الانتقاء في السمات الحقلية فيما يتعلق بالسمات ذات الاهتمام. التصنيف: 1. نباتي- عائلة Bromeliaceae أو عائلة الأناناس. العائلة الفرعية: Bromelioideae. الجنس: Ananas. الجنس الفرعي: comosus. الصنف: "روز" `Rose` ، اسم المستنبط "EF2-114". 2. تجاري- نبات فاكهة من الفصيلة البروميلية. الشكل العام: ينمو "روز" `Rose` بمعدل 1.72.+-.0.02 ملم في اليوم (الجدول 7) إلى أن يصل إلى مرحلة الإزهار حيث يتغير النبات من النمو الخضري إلى مرحلة النمو الثمري. يتضمن هذا التحول وجود تغير في النسيج النباتي القابل للتكاثر الخاص بالأزهار. يكون توجه النبات مفتوحًا ويبلغ طوله قبل مرحلة الإزهار مباشرة 116.0.+-.1.0 سم مع وجود ساق بارتفاع 34.7.+-.0.5 سم ويبلغ طول الورقة 97.6.+-.2.0 سم (الجدول 7). يتكون ارتفاع الورقة من وردة مضغوطة تتداخل مع أوراق لاعنقية ترتفع من ساق مركزية وتحيط بإزهار مركب قبل فترة الإزهار. يكون إنتاج النبتات (الأجزاء الماصة والحبيبات والقصاصات) محدود جدًا ولكنه بالاستناد على الموسم، من الممكن أن تتراوح القصاصات من صفر إلى 2.0.+-.1 لكل نبات. السيقان: يكون الساق مستقيم الشكل وتتم تغطيته بأوراق متداخلة مرتبطة بطريقة مستطرفة ويبلغ طوله 34.7.+-.0.45 سم (الجدول 7). يميل لون الساق إلى اللون الرمادي (7.5GY 7/1). الأوراق: تكون الأوراق لاعنقية وسنانية الشكل ومستطيلة ونضرة ذات شكل قمة مستدقة الطرف وتشكل شكل وردة مع انتظام الأوراق على الساق 5/13. تكون الأوراق خضراء داكنة (5GY 5/6 إلى 5/10) على السطح العلوي وخضراء فاتحة (5GY 7/4 إلى 7/10) على السطح السفلي بعرض عند منتصف الورقة يتراوح من 6 إلى 7 سم مع وجود دعامات عند الأطراف فقط (القمم) مع عدم تراكم مادة الأنثوسيانين وعدم تعدد الألوان. توجد أشكال شعرية في الجانب مجافي المحور من الأوراق. وفقًا لظروف النمو، قد يتراوح عدد الأوراق النشطة لكل نبات من 40 إلى 60. الإزهار: في صنف "روز" `Rose` ، يكون عدد الأيام اعتبارًا من حث الزهرة إلى ظهور الشكل المخروطي (البرعم الزهري) 35.+-.1 يوم مع وجود 19.+-.1 يوم إضافي لتفتح الزهرة الأولى. يكون عدد الأيام من الزهرة الأولى إلى الزهرة الأخيرة 14.+-.0.4 يومًا. تنتج إجمالي 91.+-.1 زهرة (الجدول 7). يشبه إزهار "روز" `Rose` إزهار MD2 تمامًا حيث تكون الأزهار مركبة مع وجود أزهار ثنائية الجنس فردية غير متوافقة ذاتيًا تحتوي على ثلاث سبلات وستة سداة وثلاثة مياسم وثلاثة مدقات (كربلات). يتم تجميع تنظيم أجزاء المئبر. تكون السبلات ملساء وأرجوانية اللون (10P 3/4 إلى 3/8) عند الجانب العلوي وخضراء (5GY 5/10 إلى 6/10) عند الجانب السفلي. تكون قواعد البتلات حُرة (غير مدمجة)، وتكون البتلة باللون الأبيض (10YR 8/1) عند القاعدة وباللون الأرجواني الداكن (5RP 3/4 إلى 3/8) عند الطرف. تكون البتلات متراكبة. تنتج الأزهار عدد قليل من حبوب اللقاح عند أجزاء المئبر وتكون بطول متوسط (بنفس طول السداة). الثمرة: 1. الشكل العام: بعد تفتح الزهرة الأولى، تحتاج ثمرة "روز" `Rose` 96.+-.2 يومًا لكي تنمو وتنضج. تحتوي الثمرة على رائحة مميزة ومحتوى متوسط من الألياف. تكون الثمار الصغيرة مسطحة من عند المنتصف وبارزة من عند الأطراف. 2. شكل الثمرة: تكون الثمرة أسطوانية الشكل. يبلغ وزنها المتوسط 1492.+-.24 جم بطول 15.7.+-.0.1 سم (مع عدم تضمين التاج)، وطول قطر 12.8.+-.0.1 سم عند القاعدة وطول قطر 12.1.+-.0.1 سم عند جزء المنتصف وطول قطر 11.4.+-.0.1 سم عند الجزء العلوي. يبلغ طول قطر اللب 2.7.+-.0.1 سم (الجدول 7). 3. قشرة الثمرة: يكون اللون أخضر داكن (5G 5/6 إلى 5/10) حتى من 3 إلى 4 أسابيع قبل النضوج ثم يتحول لون القشرة إلى لون "جلد النمر" (الشكل 5). توجد خاصية لون جلد النمر المحددة على أنها لون يظهر على القشرة الخارجية shell في جانب كل ثمرة صغيرة حيث تكون عبارة عن توليفة تجمع بين الألوان الأخضر (5G 7/6 إلى 7/10) والأصفر (5Y 7/6 إلى 7/10) والبرتقالي (5YR 3/5 إلى 6/5) والأحمر (5R 2/4 إلى 5/4) بسبب تعبير جينات الكاروتينات carotenoid في القشرة (الأشكال من 5 إلى 7). يكون لون قشرة الثمرة في مرحلة الاستهلاك أصفر/ برتقالي (2.5Y 8/8 إلى 7.5YR 7/10، الشكل 6). 4. السويقة: تتطور الثمرة من النسيج النباتي القابل للتكاثر القمي الخاص بالنبات على سويقة قصيرة. في مرحلة إنضاج الثمرة، يصل طول السويقة إلى 17.0.+-.0.3 سم بطول قطر 2.5.+-.0.3 سم (الجدول 7) وتكون باللون الأخضر (5GY 4/6). توجد أشكال شعرية على السويقة. توجد قنابات متراكبة عند قاعدة السويقة. يبلغ طول أطول قنابة 18.7.+-.6.2 سم. 5. التاج: يكون تاج "روز" `Rose` مخروطي الشكل ويشبه MD2 من حيث الوزن والطول (الجدول 9)، ويتم تصنيفه على أنه طويل (>20 سم) وثقيل الوزن (>130 جم). يكون لون أوراق التاج 5GY 6/4 إلى 8/4. 6. اللب: يتسم اللب بأنه يحتوي على درجة صلابة بمقدار 3.4.+-.0.1 جم/ ن وعصارة بمقدار 0.50.+-.0.01 مل/ جم (الجدول 7). يكون لب الثمرة صلبًا وليفي وحمضي وتشبه درجات البركس والحموضة نفس الدرجات الخاصة بصنف MD2 (الجدول 4) بينما توجد اختلافات جوهرية بين الصنفين فيما يتعلق بالعناصر الغذائية مثل مادة الليكوبين lycopene وبيتا- كاروتين وفيتامين ج والبوتاسيوم (انظر الجدول 5). تكسب مادة الليكوبين lycopene لب الثمرة اللون الأحمر الفاتح (5R 7/6 إلى 7/8، 7.5R 7/6 إلى 7/8، 7.5R 6/6 إلى 6/8) مع وجود نقط تتراوح من اللون الأصفر المائل إلى البرتقالي إلى اللون الأصفر الذهبي (2.5Y 8/8 إلى 8/10). من الممكن أن يتراوح عدد النقاط من 0 إلى 10 وفقًا لظروف الزراعة. تمت ملاحظة وجود اختلافات طفيفة بين لب ثمرة روز وMD2 فيما يتعلق ببعض العناصر الغذائية الأخرى (الرماد، الكربوهيدرات، الرطوبة، السكروز فيتامين ج ومادة الليوسين) (الجدول 6) بينما تقع هذه الاختلافات ضمن النطاق المبلغ عنه من العناصر الغذائية في أصناف الأناناس وتعتبر غير مهمة من الناحية الحيوية ضمن سياق النظام الغذائي الأمريكي. مقاومة/ تعرض النبات/ الثمرة للآفات والأمراض: من المتوقع تماثل درجة مقاومة / تعرض روز لفطر Fusarium subglutinans وغيره من الآفات والأمراض مع درجة MD2 (انظر المخترع Morales واخرين عام 2006 ، وثيقة أمريكية رقم 16328 خاصة بخصائص MD2 ). أكياس التكاثر الخضرية: يتم التكاثر التجاري من خلال أكياس التكاثر الخضرية (الأجزاء الماصة، نبتات الساق، والحبيبات والقصاصات وتاج الثمار، الشكل 12). ينتج نبات "روز" `Rose` متوسط 0.72.+-.0.06 قصاصة (الجدول 7) و0.76.+-.0.02 ماص أرضي (عدد منخفض) و0.90.+-.0.13 ماص (عدد منخفض و0.40.+-.0.02 حبيبة (عدد منخفض) (الجدول 8). الحيوية: تعتبر حيوية النبات مشابهة لحيوية الصنف MD2. الحصاد: في ظل الظروف الموجودة في منطقة بوينس آيرس، كوستاريكا، يتم حصاد محصول النبات بعد مرور ما يتراوح من 150 إلى 170 يومًا من تاريخ الزراعة حسب الموسم (جاف أو مطير)، حيث يتم حصاد محصول العقر بعد مرور 12 شهرًا على حساد محصول النبات. التخزين: من المتوقع أن تتشابه خصائص التخزين وما بعد الحصاد الخاصة بصنف روز مع تلك الخصائص الخاصة بصنف MD2. الناتج: من المقدر أن يشبه الناتج ناتح صنف MD2، من 120 إلى 125 طن متر/ هكتار في محصول النبات ومن 90 إلى 100 طن متري/ هكتار في محصول العقر. السوق: سيتم تخصيص الفاكهة لسوق الفاكهة الدولي وتسويقها في سوق الفاكهة الطازجة. يمكن تصنيع الفاكهة المتبقية (كما هي معرفة في جزء "الوصف التفصيلي للاختراع") وتحويلها إلى عصير أو منتج مجمد.
الجداول: تعقد الجداول من 4إلى 10 مقارنة بين روز وMD2. تم قياس واحد وعشرين خاصية كمية بالتفصيل فيما يتعلق بصنف روز وMD2 وتبين عدم وجود أي اختلافات جوهرية من الناحية الإحصائية بين الصنفين فيما يتعلق بعدد 21 خاصية (الجدول 7). كما تم قياس الأنماط الظاهرية التفصيلية لكل من روز وMD2 وتبين أنه من بين 17 سمة، يوجد اختلاف جوهري بخصوص لون اللب ولون القشرة الخارجية shell فقط بين الصنفين (الجدول 8). تم إجراء تحليلات استشعار على ثمار روز وMD2 وتبين عدم وجود أي اختلافات جوهرية من الناحية الإحصائية بين الصنفين فيما يتعلق بعدد 11 سمة تم قياسها (الجدولين 9 و10).
عناصر الحماية
نطالب بحماية ما يلي:
1 صنف جديد ومميز من نبات الأناناس باسم "روز" `Rose` كما هو موضح ومبين في هذه الوثيقة.
أنجليزي إلى عربي: STABLE VACCINE *** COMPRISING INTER ALIA LIVE ATTENUATED RECOMBINANT FLAVIVIRUS AND PROCESS FOR PREPARATION THEREOF General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: القانون: براءات الاختراع، العلامات التجارية، حقوق الملكية
لغة نص المصدر - أنجليزي ABSTRACT
STABLE VACCINE *** COMPRISING INTER ALIA LIVE ATTENUATED RECOMBINANT FLAVIVIRUS AND PROCESS FOR PREPARATION THEREOF
Stable lyophilized immunogenic compositions comprising inter alia live attenuated recombinant flaviviruses, more preferably live attenuated recombinant dengue viruses, atleast one carbohydrate, atleast one amino acid and is particularly amenable to rapid freeze-drying treatments wherein, the composition preserves desired characteristics of a virus, including virus viability, immunogenicity and stability. The said immunogenic composition is devoid of preservatives, polymers and surfactants. The methods for manufacturing said stable lyophilized immunogenic compositions.
Title
"STABLE VACCINE *** COMPRISING INTER ALIA LIVE ATTENUATED RECOMBINANT FLAVIVIRUS AND PROCESS FOR PREPARATION THEREOF"
FIELD OF INVENTION
The present disclosure relates to the field of biotechnology, more particularly, it relates to a live attenuated flavivirus vaccine composition and the method of preparing the same. The present disclosure further relates to an improved methodology in the field of live attenuated flavivirus vaccine production.
BACKGROUND
The flavivirus genome consists of single stranded, positive sense, RNA molecule of 11 kilobases,containing single open reading frame. The RNA is translated into a polyprotein that is processed into at least 10 gene products: 3 structural proteins - Nucleocapsid or Core (C), Premembrane (prM), & Envelope (E) & 7 non-structural (NS) proteins - NS 1, 2A, 2B, 3, 4A, 4B, & 5. (Lindenbach BD, et al., In: Fields Virology. Edited by Knipe DM, Howley PM, Griffin PE, et al. Philadelphia: Wolters Kluwer, Lippencott Williams and Wilkins; 2007. pp. 1101-1152). A number of these flaviviruses use arthropods (e.g., biting ticks and/or mosquitoes) as a means for transmission to virus recipients. Such arthropod-borne viruses (i.e., arboviruses) constitute a major worldwide health concern due to their highly pathogenic nature in humans. (Fernandez-Garcia MD, et al., Cell Host Microbe, 2009, 5:318-328). More specifically, human arbovirus pathogens include yellow fever (YF), Japanese encephalitis (JE), dengue (DEN), West Nile (WN) and tick-borne encephalitis (TBE) viruses that exist in nature in life cycles which involve mosquito or tick vectors and avian and/or mammalian competent reservoir hosts. (Gubler D, et al., In: Fields Virology. Edited by Knipe DM, Howley PM, Griffin PE, et al. 5th ed. Philadelphia: Wolters Kluwer, Lippencott Williams and Wilkins; 2007. pp. 1153-1252).
Yet, Dengue virus (DENV) have become the most important human arbovirus worldwide with estimates of as many as 500 million dengue infections occurring annually, resulting in more than 2 million cases of severe disease known as dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome and 21000 deaths. There are four serotypes of dengue virus DENV1 DENV2, DENV3, and DENV4).
Numerous methods are known for producing live attenuated recombinant flavivirus preparations for vaccine and other purposes. Compositions and methods useful in freezing, lyophilizing, or otherwise storing viable virus preparations for laboratory or vaccine use in order to preserve their activity are also known.
The aqueous compositions of flaviviruses do not allow good viral stability in the long term and at a temperature above 5°C. By way of example, the bulk aqueous compositions of the YF-DEN (yellow fever-dengue) chimera lose more than 4 log, stabilized in liquid after storage for 1 day at 37°C.Now, the thermostability represents a serious problem in subtropical Dengue-endemic countries where transport under cold-chain conditions is difficult.
Lyophilization is a common mode of stabilization of vaccines. However, lyophilization causes loss in virus potency. Vaccines lose potency over time and the rate of potency loss is temperature-dependent. Live viruses are susceptible to osmotic, thermal and vacuum shocks. Enveloped viruses possess a lipid bilayer, which is considered as the less stable virus component because of its high fragility. Live viruses are susceptible to various stresses during lyophilization steps like freezing, primary drying, secondary drying that could affect the physico-chemical stability of viruses. Owing to their structure, loss of potency during freeze-drying can be due to protein destabilization (e.g. unfolding, degradation,and aggregation), nucleic acid degradation, lipid layer alteration(e.g. phase transition, mechanical damage) and stresses relatedto changes in the internal (ice formation)and external (pH and osmolarity change) virus environment.The dehydration step of lyophilization results in collapse of the hydrogen bond structure of proteins which is accompanied with increased mobility of amino acid components of virus epitopes. It has been reported that in some cases lyophilization causes upto 40% loss in virus potency.
Though a lot of information is available on stress mechanisms and stabilization strategies of pharmaceutical peptides, proteins and DNA during lyophilization, due to the molecular complexity of viruses, different destabilization pathways and lack of analytical techniques permitting measurement of physico-chemical changes in the antigen’s structure during and after lyophilization mean that viruses constitute a particular lyophilization challenge. The destabilization mechanisms as well as protection mechanisms for live, attenuated viral vaccines during lyophilization are not well known.
Hansen et al 2015 (Freeze-drying of live virus vaccines: A review, Hansen et al., Vaccine 33 (2015) 5507–5519) discloses a compilation of several freeze dried virus vaccine formulation (s) wherein majority of the formulations mention about preferential use of sugar alcohol/protein additive (i.e. Sucrose + Trehalose, Sorbitol, Hydrolyzed gelatin, Lactalbumin hydrolysates) for obtaining a lyophilized virus vaccine.
Following flavivirus vaccine formulations have been previously reported- 1) Sorbitol, Trehalose, Urea, 2) Lactose, Sorbitol, HSA,;3) Lactose, Mannitol, HSA; 4) Poloxamer, Human Albumin , Trehalose, PBS; 5) Trehalose, Recombinant HSA, F127 (polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer).
In the case of HSA, the inclusion of these materials may raise potential safety concerns if these materials are derived from at-risk human or animal sources. Such added proteins are of concern for two main reasons. The first concern arises from the potential for animal- and human-derived protein to contain one or more adventitious agents. The second concern arises from the potential for animal- or human-derived protein to elicit an allergic reaction in susceptible individuals. Also, previously reported lyophilized vaccine formulation uses proteins which, even if produced using processes supporting high yields, have a cost implications for formulations. “For a vaccine to be broadly adopted in low income regions it is crucial to keep the cost of vaccine and its components such as stabilizers low. It is also crucial from the regulatory and safety point of view that excipients and stabilizers used should contain neither substances of animal origin nor contain animal component. Animal-derived compounds represent a potential danger due to the possible contamination with the scarpie-prion-protein (PrPSC) and the new variant of the Creutzefeld-Jakob disease(vCJD).
Nonionic surfactants used in pharmaceutical formulations include Triton™ X-100, Pluronic® F-68, F-88, and F-127 (poloxamers), Brij 35 (polyoxy-ethylene alkyl ether), polyoxyl stearate 40, Cremophor® EL, and alpha-tocopherol TPGS. Each of these surfactants have in common the fact that they all contain polyoxyethylene moieties and thus to a greater or lesser extent, exhibit a similar problem, in that the polyoxyethylene moiety auto oxidizes to produce reactive peroxides, which causes an increase in unwanted protein immunogenicity. (Refer Edward T. Maggio et al; Polysorbates, peroxides, protein aggregation, immunogenicity - a growing concern; Journal of Excipients and Food Chemicals 3(2):46-53; 2012).
PVPhas been reported to destabilize live attenuated virus formulations. (Refer: JA White et al; Development of a stable liquid formulation of live attenuated influenza vaccine; Vaccine Volume 34, Issue 32, 12 July 2016, Pages 3676-3683; 2016).
Trehalose is costly; it has to be combined with other sugars and protein additives (Gelatin) to achieve stability. Also, other stabilizers are better than trehalose for enhancing shelf life stability of a lyophilized vaccine.
Sorbitol has a low glass-transition temperature (Tg)(−1.6 Deg C), therefore cannot be used as a main formulation component. The low Tg of sorbitol limits its use. Sorbitol has to be combined with other sugars and protein additives (Gelatin) to achieve stability.
Typically, recombinant viruses have been stored as freeze-dried pellets containing hydrolysates of casein and/or collagen in phosphate-buffered physiological saline (PBS). These pellets are then re-hydrated in a pharmaceutically acceptable solution such as 0.4-0.9% NaCl. However, there are significant disadvantages associated with such formulations and are known in the art. Among these are incompletely defined components, complex preparation procedures, high cost, and inability to maintain certain desired characteristics of the virus.
Flavivirus vaccine formulations developed previously has been stable at 2-8 deg C for 6 months, 25 deg C for 7 days and at 37 deg C for 1-2 days. There remains a need for developing formulations that comprise of minimum number of excipients and impart long term thermostability to flavivirus vaccines, in particular the live attenuated recombinant/chimeric Dengue viruses.
Such compositions/formulations and process for preparing of the same are described herein.
SUMMARY
The present disclosure provides an immunogenic composition comprising atleast one live attenuated flavivirus, atleast one carbohydrate, and atleast one amino acid wherein, the composition is amenable to rapid freeze-drying treatments and the reconstituted composition preserves the desired characteristics of a virus, including virus viability, immunogenicity and stability.
The present disclosure more particularly relates to a lyophilized immunogenic compositions comprising:
a) Live attenuated recombinant/chimeric dengue virus, wherein the live attenuated dengue virus strains used are rDEN1Δ30-1545;rDEN2/4Δ30(ME)-1495, 7163; rDEN3Δ30/31-7164 and rDEN4Δ30-7132, 7163, 8308obtained from the United States National Institutes of Health (NIH).
b) Sucrose about 3% w/v to about 6% w/v
c) Glycine about 3% w/v to about 6% w/v
The present disclosure further provides a method for manufacturing such vaccine composition/formulation.
OBJECTS
Some of the objects of the present disclosure, which at least one embodiment herein satisfies, are as follows:
An object of the present disclosure is to ameliorate one or more problems of the prior art or to at least provide a useful alternative.
Another object of the present disclosure is to provide a stabilizing lyophilized vaccine compositions/formulations comprising of atleast one flavivirus, atleast one carbohydrate, atleast one amino acid, and optionally base. Wherein, the composition preserves desired characteristics of a virus, including virus viability, immunogenicity and stability.
Yet another object of the present disclosure is to provide a stabilizing lyophilized vaccine compositions/formulations comprising inter alia a live attenuated recombinant/chimeric dengue virus serotypes (DEN 1, DEN 2, DEN 3, DEN 4) suitable for treating or preventing dengue infection, or to prevent, ameliorate, or delay the onset or progression of the clinical manifestations thereof.
Yet another object of the present disclosure is to provide a method for manufacturing such vaccine composition/formulation.
Other objects and advantages of the present disclosure will be more apparent from the following description, which is not intended to limit the scope of the present disclosure.
DETAILED DESCRIPTION
Although the present disclosure may be susceptible to different embodiments, certain embodiments are shown in the figures and following detailed discussion, with the understanding that the present disclosure can be considered an exemplification of the principles of the disclosure and is not intended to limit the scope of disclosure to that which is illustrated and disclosed in this description.
According to a first embodiment of the present disclosure, an immunogenic compositioncomprising one or more live attenuated flaviviruses, one or more carbohydrate, and one or more amino acid wherein, the composition is amenable to rapid freeze-drying treatments and the reconstituted composition preserves the desired characteristics of a virus, including virus viability, immunogenicity and stability.
The term "live" is used in its conventional meaning, a live virus is a virus which has not been inactivated, i.e. a virus capable of replicating on permissive cells. A live attenuated flavivirus is a virus which does not induce the disease caused by the corresponding wild-type virus in animals or humans and which is capable of inducing a specific immune response.
According to a second embodiment of the present disclosure, the one or more live attenuated flaviviruses are a recombinant flaviviruses and/or a chimeric flaviviruses.
According to a third embodiment of the present disclosure, one or more live attenuated flaviviruses is selected from the group consisting of dengue (DEN) virus, yellow fever (YF) virus, Japanese encephalitis (JE) virus, Kunjin virus, West Nile (WN) virus, tick-borne encephalitis (TBE) virus, St. Louis encephalitis virus, Murray Valley encephalitis virus, Zika virus, or any related flavivirus thereof.
Yet according to the preferred aspect of the third embodiment, one or more live attenuated flaviviruses is dengue (DEN) virus, optionally a plurality of live attenuated dengue (DEN) viruses of different serotypes selected from group of DEN-1, DEN-2, DEN-3 and DEN-4.
According to a fourth embodiment of the present disclosure, one or more live attenuated flaviviruses is selected from the group consisting of live attenuated chimeric/recombinant yellow fever (YF) viruses and/or of a live attenuated chimeric/recombinant Japanese encephalitis (JE) viruses, and/or of a live attenuated chimeric/recombinant dengue (DEN) viruses, and/or of a live attenuated chimeric/recombinant West Nile (WN) viruses and/or of a live attenuated chimeric/recombinant tick-borne encephalitis (TBE) viruses and/or of a chimeric dengue virus (yellow fever-dengue) virus, and/or of a chimeric YF-WN (yellow fever-West Nile virus) virus and/or of a chimeric YF-JE (yellow fever-Japanese encephalitis) virus or any related flavivirus thereof.
Yet according to a preferred aspect of fourth embodiment, one or more live attenuated flaviviruses is live attenuated chimeric/recombinant dengue (DEN) viruses.
According to a fifth embodiment of the present disclosure, live attenuated recombinant/chimeric dengue viruses used in immunogenic composition is described below:
A) Brief description of NIH recombinant strains / Its Construction:
All the activities related to generation of attenuated vaccine strains of all the four dengue virus serotypes (DEN 1, DEN 2, DEN 3, & DEN 4) explained below have been conducted at NIH, US. Contents of WO2002095075 and WO2008022196 are incorporated herein in entirety.
Origin of the gene
1. Each of the attenuated strain of dengue virus serotype 1-4 (rDEN1Δ30, rDEN2/4Δ30(ME), rDEN3Δ30/31 & rDEN4Δ30) has been developed by deletion of around 30 nucleotides (Δ30) (additional 31 nucleotide (Δ31) in case of DEN-3) from the non-translational 3' end of the wild type strains. The ∆31 mutation can also be generated alone to discern the contribution of either ∆30 or ∆31 in the combined ∆30/31deletion mutation.
2. The DEN 2 virus serotype has been developed by replacing the M and E protein of the attenuated DEN 4 serotype with that of DEN 2 M and E protein.
3. Structurally all the four strains are enveloped positive sense RNA viruses of 35-50 nanometer size.
4. The rDEN1Δ30-1545 strain used herein encodes a single Lys→Arg mutation at amino acid residue number 484 (A1545G mutation) in the viral polyprotein.
5. The rDEN2/4Δ30(ME)-1495, 7163 strain used herein encodes a Ser→Phe mutation at amino acid residue number 186 (C1495T mutation) and a Leu→Phe mutation at amino acid residue number 112 (A7163C mutation) in the viral polyprotein.
6. rDEN3Δ30/31 includes the original Δ30 deletion and a non-contiguous 31 nucleotide deletion that removes both the original TL-2 and TL-3 structures. The resultant rDEN3Δ30/31-7164 strain used herein encodes a Val→Ala mutation at amino acid residue number 115 (T7164C mutation) in the viral polyprotein.
7. The rDEN4Δ30-7132, 7163, 8308 strain used herein encodes a Thr→Ile mutation at amino acid residue number 102 (C7132T mutation), a Leu→Phe mutation at amino acid residue number 112 (A7163C mutation) and a Lys→Arg mutation at amino acid residue number 249 (A8308G mutation) in the viral polyprotein.
Figures depicting the RNA sequence and the virus structure of the DEN vaccine strains:
Refer Figure 1, 2 and 3
The wild type strains used for the generation of vaccine strains are given in Table below:
Table 1: Nomenclature of wild type and vaccine strains
Serotype Wild type strain Vaccine strain
DEN 1 Western Pacific strain rDEN1∆30-1545
DEN 2 New Guinea strain rDEN2/4∆30(ME)-1495,7163
DEN 3 Sleman/78 rDEN3∆30/31-7164
DEN 4 Dominica rDEN4∆30-7132,7163,8308
B) Transformation procedure:
For the generation of dengue virus vaccine strains essentially the following steps were followed-
1. Plasmid containing full length cDNA copy of the wild type DEN virus was created by generation of short DNA segments using reverse transcriptase and PCR. Fragments so obtained were appropriately ligated to generate an intact double stranded DNA comprising of the full length genomic cDNA strand of the wild type DEN that was cloned in a plasmid.
2. ∆30 mutation was inserted by mutating a sub fragment of the 3’UTR and replacing the 3’UTR of the wild type DEN with the sub fragment containing the ∆30 region. Specific mutations were introduced by site specific PCR mutagenesis.
3. For the generation of DEN 2 vaccine strain structural genes M and E, of DEN 2 were cloned in plasmid and used to replace the structural genes in the DEN 4 cloned plasmid containing the ∆30 mutation. For the generation of DEN 3 vaccine strain two deletions of 30 and 31 nucleotides was introduced in the wild type clone.
4. Genome length capped RNA transcripts were synthesized from linearized plasmids using AmpliCap SP6 Message Maker Kit (EpiCentre Technologies, Madison) and the RNA purified using the RNeasy Mini kit (Qiagen, Valencia, CA). Vero cells (C6/36 for dengue 3) were transfected with purified RNA transcripts using DOTAP liposomal transfection reagents (Roche, Indianapolis, IN) to recover desired virus. Rescued viruses were subjected to amplification, terminal dilution cloning and final amplification for the generation of seed virus in Vero cells. Details on number of cycles of amplification and terminal dilution undertaken for each strain are tabulated below in table 2.
Table 2: Cycle of amplification and terminal dilution for seed virus preparation
Virus strain DEN 1 DEN 2 DEN 3 DEN 4
Rescued in Vero Vero C6/36* Vero
Amplification Nil Nil 6X 3X
Terminal dilution cloning 2X 2X 3X 3X
Amplification 2X 2X 2X 2X
*All further work of amplification and terminal dilution cloning was carried out in Vero cells.
According to a first aspect of the fifth embodiment, the chimeric viruses have the particularity of exhibiting the characteristics of the live attenuated viruses as defined above. It is therefore possible to use, in the context of the disclosure, any chimeric virus expressing the envelope protein or one or more epitopes of one or more envelope protein(s) of one or more flaviviruses and inducing a specific immune response comprising antibodies which neutralize the strain, or at least one of the strains, from which the envelope protein or said epitope is derived.
According to a second aspect of the fifth embodiment, the live attenuated recombinant dengue virus nucleic acid further comprises a mutation generating a mutant having a phenotype selected from the group consisting of temperature sensitivity in Vero cells or the human liver cell line HuH-7, host- cell restriction in mosquito cells or the human liver cell line HuH-7, host-cell adaptation for improved replication in Vero cells, or attenuation in mice or monkeys, wherein the composition comprising a member selected from the group consisting of:
(1) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(2) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(3) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(4) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(5) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(6) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(7) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(8) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(9) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(10) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(11) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(12) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(13) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(14) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(15) rDEMΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(16) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(17) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(18) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(19) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(20) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(21) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(22) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(23) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(24) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(25) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(26) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(27) rDEMΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(28) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(29) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(30) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(31) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(32) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(33) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(34) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(35) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(36) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(37) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(38) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(39) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(40) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(41) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(42) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(43) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(44) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(45) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(46) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(47) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(48) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(49) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(50) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(51) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(52) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(53) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(54) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(55) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(56) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(57) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(58) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(59) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(60) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(61) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(62) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(63) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(64) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(65) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(66) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(67) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(68) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(69) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(70) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(71) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(72) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(73) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(74) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(75) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(76) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(77) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(78) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(79) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30, i
(80) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(81) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(82) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(83) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(84) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(85) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(86) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(87) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(88) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(89) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30, ι
(90) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(91) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(92) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ305 rDEN4/3Δ30,
(93) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(94) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(95) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(96) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(97) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(98) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(99) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30, ι
(100) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(101) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(102) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(103) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(104) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(105) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(106) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(107) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(108) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(109) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(110) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(111) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(112) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(113) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(114) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(115) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(116) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(117) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(118) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(119) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(120) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(121) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ305 rDEN4Δ30,
(122) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(123) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(124) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(125) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(126) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(127) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(128) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(129) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(130) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(131) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(132) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(133) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(134) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(135) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(136) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(137) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(138) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(139) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(140) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(141) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(142) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(143) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(144) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(145) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(146) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(147) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(148) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(149) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(150) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(151) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(152) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(153) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(154) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(155) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(156) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(157) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(158) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(159) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(160) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(161) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(162) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(163) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(164) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(165) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(166) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(167) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(168) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(169) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(170) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(171) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(172) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(173) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(174) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(175) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(176) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(177) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(178) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(179) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(180) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(181) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(182) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(183) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(184) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(185) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(186) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(187) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(188) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(189) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(190) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(191) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(192) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(193) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(194) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(195) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(196) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(197) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(198) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(199) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(200) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(201) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(202) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(203) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(204) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(205) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(206) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(207) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(208) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(209) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(210) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(211) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(212) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(213) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(214) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(215) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(216) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(217) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(218) rDENl/4Δ305rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(219) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(220) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(221) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(222) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(223) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ305 rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(224) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(225) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(226) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(227) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(228) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(229) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(230) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(231) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(232) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(233) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(234) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(235) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(236) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(237) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(238) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(239) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(240) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(241) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(242) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(243) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(244) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(245) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(246) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(247) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(248) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(249) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(250) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(251) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(252) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(253) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(254) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(255) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
and
(256) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30.
According to sixth embodiment of the present disclosure, one or more carbohydrates include, but are not limited to, natural carbohydrates, synthetic carbohydrates, polyols, glass transition facilitating agents monosaccharides, disaccharides, trisaccharides, oligosaccharides and their corresponding sugar alcohols, polyhydroxyl compounds such as carbohydrate derivatives and chemically modified carbohydrates, hydroxyethyl starch and sugar copolymers. Both natural and synthetic carbohydrates are suitable for use. Synthetic carbohydrates include, but are not limited to, those which have the glycosidic bond replaced by a thiol or carbon bond. Both D and L forms of the carbohydrates may be used. The carbohydrate may be non-reducing or reducing. Where a reducing carbohydrate is used, the addition of inhibitors of the Maillard reaction is preferred. Reducing carbohydrates suitable for use in the composition are those known in the art and include, but are not limited to, glucose, sucrose, maltose, lactose, fructose, galactose, mannose, maltulose and lactulose. Non-reducing carbohydrates include, but are not limited to, non-reducing glycosides of polyhydroxyl compounds selected from sugar alcohols and other straight chain polyalcohols. Other useful carbohydrates include raffinose, stachyose, melezitose, dextran, cellibiose, mannobiose and sugar alcohols. The sugar alcohol glycosides are preferably monoglycosides, in particular the compounds obtained by reduction of disaccharides such as lactose, maltose, lactulose and maltulose. Glass forming agent is selected from the group consisting of sucrose, mannitol, trehalose, mannose, raffinose, lactitol, lactobionic acid, glucose, maltulose, iso- maltulose, maltose, lactose sorbitol, dextrose, fucose or a combination thereof.
Yet according to the preferred aspect of the sixth embodiment, an immunogenic composition comprises of sucrose as suitable carbohydrate stabilizer ranging in between 1% and 20% weight/volume, preferably in between 1-10%, more preferably in between 3-6%, most preferably less than or equal to 5% (w/v).
According to seventh embodiment of the present disclosure, the one or more amino acid include, but are not limited to, leucine, iso-leucine, histidine, glycine, glutamine, arginine, lysine, alanine or a combination of amino acids, peptide, hydrolysed protein or protein such as serum albumin.
Yet according to the preferred aspect of the seventh embodiment, an immunogenic composition comprises of glycine as suitable amino acid stabilizer ranging in between 1% and 20% weight/volume, preferably in between 1-10%, more preferably in between 3-6%,most preferably less than or equal to 5% (w/v).
According to a eighth embodiment of the present disclosure, an immunogenic composition may additionally comprise of a buffering agent selected from the group consisting of carbonate, phosphate, citrate, lactate, gluconate and tartrate buffering agents, as well as more complex organic buffering agents including a phosphate buffering agent that contains sodium phosphate and/or potassium phosphate in a ratio selected to achieve the desired pH. In another example, the buffering agent contains Tris (hydroxymethyl) aminomethane, or "Tris", formulated to achieve the desired pH. Yet in another example, the buffering agent could be the minimum essential medium with Hanks salts.
According to a ninth embodiment of the present disclosure, an immunogenic composition may additionally comprise of preservative selected from the group consisting of 2-phenoxyethanol, Benzethonium chloride (Phemerol), Phenol, m-cresol, Thiomersal, Formaldehyde, methyl and propyl parabens, benzalkonium chloride, benzyl alcohol, chlorobutanol, p-chlor-m-cresol, or benzyl alcohol or a combination thereof.
According to a tenth embodiment of the present disclosure, an immunogenic composition may additionally comprise of pharmaceutically acceptable excipients selected from the group consisting of surfactants, polymers and salts. Examples of Surfactants may include non-ionic surfactants such as polysorbate 20, polysorbate 80, etc. Examples of the polymers may include dextran, carboxymethylcellulose, hyaluronic acid, cyclodextrin, etc. Examples of the salts may include NaCl, MgC12, KCl, CaC12, etc.
According to an eleventh embodiment of the present disclosure, an immunogenic composition may additionally comprise of an adjuvant selected from the group consisting of an aluminum salt, aluminum hydroxide, aluminum phosphate, aluminum hydroxyphosphate, and potassium aluminum sulfate.
According to twelfth embodiment of the present disclosure, an immunogenic composition may additionally comprise of an immunostimulatory component selected from the group consisting of: an oil and water emulsion, MF-59,a liposome, a lipopolysaccharide, a saponin, lipid A, lipid A derivatives, Monophosphoryl lipid A, 3–deacylated monophosphoryl lipid A, AS01, AS03, an oligonucleotide, an oligonucleotide comprising at least one unmethylated CpG and/or a liposome, Freund’s adjuvant, Freund’s complete adjuvant, Freund’s incomplete adjuvant, polymers, co-polymers such as polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymers, including block co-polymers, polymer p 1005, CRL-8300 adjuvant, muramyl dipeptide, TLR-4 agonists, flagellin, flagellins derived from gram negative bacteria, TLR-5 agonists, fragments of flagellins capable of binding to TLR-5 receptors, QS-21, ISCOMS, saponin combination with sterols and lipids.
According to thirteenth embodiment of the present disclosure, the said immunogenic composition is lyophilized (freeze-dried).
According to a fourteenth embodiment of the present disclosure, the lyophilized immunogenic composition is stable at 2-8 deg C from 12 to 36 months; at 25 deg C from 2 to 6 months; at 37 deg C from 1 week to 4 weeks, at 42 deg C for 2-7 days, at 55 deg C for 2-7 days.
According to fifteenth embodiment of the present disclosure, a method for reconstituting a lyophilized immunogenic composition comprising the step of reconstituting the lyophilized immunogenic composition with an aqueous solution optionally saline or water for injection(WFI).
According to sixteenth embodiment of the present disclosure, the final pH of the immunogenic composition after reconstitution is in the range of pH 6.0 to pH 8.0; more preferably in the range of pH 7.0 to pH 8.0; more preferably in the range of pH 7.2 to pH 7.9; and most preferably in the range of pH 7.5 to pH 7.9.
According to a seventeenth embodiment of the present disclosure, the process for preparing live attenuated chimeric/recombinant tetravalent dengue(DEN) vaccine composition comprises any subset or all of the following steps:
a) Vero cells were revived and adapted to grow in Minimum essential medium (MEM) with Hank’s salt solution and 10% Fetal bovine serum
b) Vero cells were initially amplified in tissue culture flasks (TCF with 175 cm2 surface area available for cell growth) producing Master banks and Working banks of Vero cells
c) Cryopreserved cells from the working cell bank were revived, amplified and further passaged in roller bottles (850 cm2 surface area available for cell growth) and incubated at 37±1°C to obtain monolayers
d) Vero cell monolayers in roller bottles were infected with working seed of dengue virus serotypes 1, 2, 3 and 4
e) All roller bottles were incubated at 34±1°C for 20 min.; and volume top up to 120ml per RB using Minimum essential medium (MEM) with Hanks salt solution and 2% Fetal bovine serum. Further all roller bottles were incubated at 34±1°C for 2 days and 0.7RPM rolling speed.
f) On day 2, monolayers in roller bottles were washed with fresh virus medium devoid of fetal bovine serum and RBs were incubated at 34±1°C for 3 dayseach at 0.7RPM rolling speed
g) On 5th day post infection the cell supernatant from all the infected roller bottles was harvested and bottles re-fed with fresh virus medium devoid of fetal bovine serum;
h) Multiple harvests were taken and processed separately to obtain clarified monovalent virus pools (CMVPs)
i) Filtering the viral harvest by direct flow filtration (DFF) through at least one clarification filter
j) Treating the viral harvest with a non-specific endonuclease to degrade cellular DNA
k) The treated viral harvest was subjected to tangential flow filtration
l) Stabilizing the viral harvest with a stabilizing agent comprising of atleast one amino-acid and atleast one carbohydrateto form a stabilized viral harvest
m) Sterilizing the stabilized viral harvest by DFF through at least one sterilization grade filter
n) Clarified monovalent virus pools (CMVPs) of each of the dengue virus serotype were stored in polycarbonate bottles at -60°C or below
o) Clarified monovalent virus pools (CMVPs)of all four virus serotypes were mixed together to obtain final bulk which is filled in vials and lyophilized to obtain the drug product i.e recombinant dengue tetravalent vaccine (live attenuated)
According to a first aspect of seventeenth embodiment, the Vero cell line used were ATCC CCL-81 (cGMPVero, Kidney cells derived from African green monkey (Cercopithecus aeothiops; available from the ATCC, Manassas, Va., USA)
According to a second aspect of seventeenth embodiment, multiple harvests were carried out at an appropriate time interval for about 4-5 times - more preferably 4 times on 5th Day, 7th Day, 9th Day & 11th Day before discarding the input material and processed separately to obtain clarified monovalent virus pools (CMVPs).In case of multiple harvests the same quantity of input material contributes higher yield as compared to conventional single harvest method. This also saves time and total production cost for upstream processing i.e. amplification of cells for infection.
According to a third aspect of seventeenth embodiment, wherein the virus medium comprises of Minimum Essential Medium (MEM) with Hanks salt solution additionally containing Dextrose, L-Glutamine and Sodium Bicarbonate.
According to a fourth aspect of seventeenth embodiment, the medium containing the virus is clarified, typically through filters of decreasing pore sizes (e.g., 6 µ, 0.8µ, 0.45 µ, 0.2 µ). Suitable commercially available filters and filtration devices are well known in the art and can be selected by those of skill. Exemplary filtration devices include, e.g., Millipak (Millipore), Kleenpak (Pall) and Sartobran™ P filtration devices.
According to a fifth aspect of seventeenth embodiment, the filtered harvest was treated with a non-specific endonuclease most preferably Benzonase with concentration varying in between 1-10 units/ml, at temperature ranging in between 4-37°C,and for intervals ranging in between 2 hours to 12 hours.
According to a sixth aspect of seventeenth embodiment, the Benzonase treated harvest was further subjected to tangential flow filtration (TFF) typically through filters with a molecular weight cut off (MWCO) of 500KD, more preferably 300KD and most preferably 100KD.
According to seventh aspect of the seventeenth embodiment, the viral harvest was subjected to tangential flow filtration (TFF) resulting in at least 10X concentration of viral harvest and further results in the removal of residual impurities.
Yet preferable the residual impurities comprises of residual DNA, residual bovine serum albumin (BSA) and residual host cell protein.
According to eighth aspect of the seventeenth embodiment, the process described above result in a purified and concentrated flavivirus preparation more preferably dengue virus preparation wherein, the preparations comprises of concentrated live attenuated dengue virus particles, traces of residual cellular DNA (
ترجمة - عربي (تركيبات لقاح مستقرة تتضمن من بين مكونات اخرى فيروس مصغر مأشوب موهن وعملية لتحضيره)
الملخص
تركيبات مجففة أثناء التجميد مولدة للمناعة مستقرة والتي تشتمل من بين مكونات اخري فيروسات مصغرة مأشوبة موهنة وعلى نحو أكثر تفضيلآ فيروسات حمى الضنك مأشوبة حيه، وعلى الأقل واحد من الكربوهيدرات وواحد من الأحماض الأمينية على الأقل ، وهي قابلة بشكل خاص للمعالجة السريعة للتجفيف أثناء التجميد و يحافظ التركيب على الخصائص المرغوبة للفيروس ، بما في ذلك سلامة الفيروس والمناعة والاستقرار. وتعتبر التركيبة المولدة للمناعة المذكورة خالية من المواد الحافظة والبوليمرات والمواد ذات فاعلية بالسطح وطرق لتصنيع تركيبات مجففة أثناء التجميد ومولدة للمناعة مذكورة
(تركيبات لقاح مستقرة تتضمن من بين مكونات اخرى فيروس مصغر مأشوب موهن وعملية لتحضيره)
الوصف الكامل
المجال التقني:
يتعلق الكشف الحالي بمجال التقنية الحيوية، على الأخص، فهو يتعلق بتركيبة لقاح فيروسة مصفرة حية ضعيفة وطريقة لتحضيرها. يتعلق الكشف الحالي أيضاً بطريقة متطورة في مجال إنتاج لقاح الفيروسة المصفرة الحية الضعيفة.
الخلفية التقنية:
يتكون جينوم الفيروسة المصفرة من جزيء RNA فردي مجدول، موجب النسخ، يبلغ 11 كيلوقاعدة، يحتوي على إطار قراءة مفتوح فردي. يتم نقل RNA إلى بولي بروتين تتم معالجته في 10 منتجات جينية على الأقل: 3 بروتينات هيكلية – غلاف نيوكلوتيد أو قلب(C)، غشاء مسبق (prM)، و غطاء (E) و 7 بروتينات غير هيكلية (NS) - NS 1، 2A، 2B، 3، 4A، 4B، & 5. (Lindenbach BD, et al., In: Fields Virology. Edited by Knipe DM, Howley PM, Griffin PE, et al. Philadelphia: Wolters Kluwer, Lippencott Williams and Wilkins; 2007. pp. 1101-1152). يستخدم عدد من هذه الفيروسات المصفرة مفصليات (على سبيل المثال، القراد القارض و/ أو البعوض) كوسيلة لنقل الفيروس إلى مستقبله. وتشكل هذه الفيروسات التي تنقلها المفصليات (أي الفيروسات المنقولة بالمفصليات) مصدر قلق صحي عالمي كبير بسبب طبيعتها المرضية الشديدة في البشر. (Fernandez-Garcia MD, et al., Cell Host Microbe, 2009, 5:318-328). وبشكل أكثر تحديدًا، تشمل مسببات الأمراض البشرية للفيروسات المنقولة بالمفصليات الحمى الصفراء (YF)، والتهاب الدماغ الياباني (JE)، حمى الدنك (DEN)، التهاب الدماغ في غرب النيل (WN)، وبسبب الفيروسات المنقولة بالقراد (TBE) التي توجد في الطبيعة في دورات الحياة التي تنطوي على ﻨﻮاﻗﻞ البعوض أو القراد والخلايا العائلة لخزانات اﻟﻄﻴﻮر و/ أو مكون ﺜﺪﻳﻴي. (Gubler D, et al., In: Fields Virology. Edited by Knipe DM, Howley PM, Griffin PE, et al. 5th ed. Philadelphia: Wolters Kluwer, Lippencott Williams and Wilkins; 2007. pp. 1153-1252).
ومع ذلك، أصبح فيروس حمى الدنك (DENV) أهم فيروس بشري منقول بالمفصليات في جميع أنحاء العالم مع تقديرات حدوث ما يصل إلى 500 مليون عدوى بحمى الدنك سنويا، مما يؤدى إلى أكثر من مليوني حالة من حالات المرض الشديدة المعروفة باسم متلازمة حمى الدنك النزفية/ حمى الدنك و21000 حالة وفاة. توجد 4 أنماط مصلية لفيروس حمى الدنك DENV1، DENV2 و DENV3 و DENV4).
تُعرف طرق عديدة لإنتاج مستحضرات الفيروسة المصفرة الضعيفة الحية الناتجة عن عودة الارتباط الجيني للقاح وأغراض أخرى. وتُعرف أيضًا التركيبات والطرق المفيدة في التجميد، التجفيد، أو تخزين مستحضرات الفيروس الحية للاستخدام المختبري أو كلقاح للمحافظة على نشاطها.
تفقد خيميرات التركيبات المائية للفيروسات المصفرة باستقرار جيد للفيروسات على المدى الطويل وعند درجة حرارة أعلى من 5 درجات مئوية. على سبيل المثال، تمثل التركيبات المائية الضخمة لـ YF-DEN (حمى الدنك الصفراء) أكثر من 4 لوغاريتم، تستقر في السائل بعد التخزين لمدة يوم واحد عند 37 درجة مئوية، يمثل الثبات الحراري مشكلة خطيرة في البلدان الموبوءة بحمى الدنك شبه الاستوائية حيث يصعب نقلها في ظل ظروف سلسلة التبريد.
يُعد التجفيد طريقة شائعة لتثبيت اللقاحات. ومع ذلك، يسبب التجفيد خسارة في فاعلية الفيروس. تفقد اللقاحات الفاعلية بمرور الوقت ويعتمد معدل الفاقد الفعال على درجة الحرارة. تكون الفيروسات الحية عرضة للصدمات التناضحية والحرارية والتفريغ. تحتوي الفيروسات المغلفة على طبقة ثنائية من الشحوم، والتي تعتبر مكون فيروس أقل استقرارًا بسبب هشاشتها المرتفعة. تكون الفيروسات الحية عرضة للإجهادات المختلفة خلال خطوات التجفيد مثل التجميد، التجفيف الأولي، التجفيف الثانوي الذي يمكن أن يؤثر على الاستقرار الفيزيائي الكيميائي للفيروسات. نظراً لبنيتها، يمكن أن يكون فقدان الفاعلية أثناء التجفيف بالتجميد ناتجاً عن عدم استقرار البروتين (على سبيل المثال، فك الطي، التحلل، والتكتل)، تحلل الحمض النووي، تغير طبقة الدهون (مثل انتقال الطور، الضرر الميكانيكي) والضغوط المرتبطة بالتغييرات في الوسط الداخلي (تكوين الثلج) والخارجي (تغيير الأس الهيدروجيني والتغير الأسموزي) للفيروس. تؤدي خطوة التجفيف في التجفيد إلى انهيار بنية رابطة الهيدروجين للبروتينات المصاحبة لزيادة حركة مكونات الحمض الأميني في القمم اللاصقة للفيروس. وذُكر أنه في بعض الحالات يسبب التجفيد خسارة تصل إلى 40 % في فاعلية الفيروس.
على الرغم من توافر الكثير من المعلومات حول آليات الضغط واستراتيجيات تثبيت الببتيدات الصيدلانية والبروتينات والحمض النووي أثناء التجفيد، بسبب التعقيد الجزيئي للفيروسات، تشير مسارات عدم الاستقرار المختلفة ونقص التقنيات التحليلية التي تسمح بقياس التغيرات الفيزيائية الكيميائية في بنية مولد الضد خلال وبعد التجفيد إلى أن الفيروسات تشكل تحديًا خاصاً للتجفيد. لا تُعرف آليات عدم الاستقرار وكذلك آليات الحماية للقاحات الفيروسية الحية الضعيفة أثناء التجفيد جيداً.
يكشف Hansen et al 2015 (Freeze-drying of live virus vaccines: A review, Hansen et al., Vaccine 33 (2015) 5507–5519) عن مجموعة من العديد من صيغة (صيغ) لقاح الفيروس المجففة بالتجميد حيث تذكر غالبية الصيغ الاستخدام التفضيلي لكحول السكر/ مادة إضافة بروتين (مثل سكروز + تريهالوز، سوربيتول، جيلاتين مميه، نواتج تحلل لاكتو ألبيومين) للحصول على لقاح فيروس مجفف بالتجميد.
ذُكرت مسبقاً صيغ لقاح الفيروسة المصفرة التالية 1) سوربييتول، تيرهالوز، يوريا، 2) لاكتوز، سوربيتول، HSA،؛ 3) لاكتوز، مانيتول، HSA؛ 4) بولوكسامير، ألبيومين بشري، تيرهالوز، PBS؛ 5) تريهالوز، HSA ناتج عن عودة الارتباط الجيني، F127 (بوليمر بولي أوكسي إيثيلين بولي بروبلين كتلي مشترك).
في حالة HSA، يمكن أن يثير إدراج هذه المواد مخاوف تتعلق بالسلامة إذا كانت هذه المواد مشتقة من مصادر بشرية أو حيوانية معرضة للخطر. تمثل هذه البروتينات المضافة مصدر قلق لسببين رئيسيين. ينشأ القلق الأول من إمكانية احتواء البروتين المشتق من الحيوان والإنسان على واحد أو أكثر من العوامل إضافية. ينشأ القلق الثاني من احتمالية وجود البروتين المشتق من الحيوان أو الإنسان لإظهار تفاعل تحسسي لدى الأفراد المعرضين للإصابة. كذلك، تستخدم صيغة اللقاح المجففة بالتجميد المذكورة مسبقًا بروتينات لها، حتى لو تم إنتاجها باستخدام عمليات تدعم النواتج الكبيرة، آثار على التكاليف بالنسبة للصيغ. " لاعتماد لقاح على نطاق واسع في المناطق ذات الدخل المنخفض، من المهم الحفاظ على تكلفة اللقاح ومكوناته مثل انخفاض المثبتات. ومن الضروري أيضًا من وجهة النظر التنظيمية والسلامة أن السواغات والمثبتات المستخدمة ينبغي أن لا تحتوي على أي مواد ذات أصل حيواني أو تحتوي على مكونات حيوانية. تمثل المركبات المشتقة من الحيوانات خطراً محتملا بسبب التلوث الممكن ببروتين بريون سكاربي (PrPSC) والمتغير الجديد لمرض كروتزفيلد - جاكوب (vCJD).
تتضمن خوافض التوتر السطح غير الأيونية المستخدمة في الصيغ الصيدلانية على Triton™ X-100, Pluronic® F-68, F-88 و F-127 (بولوكساميرات)، Brij 35 (إيثر بولي أوكسي - إيثيلين ألكيل) وبولي أوكسيل ستيارات 40 و Cremophor® EL، ألفا – توكوفيرول TPGS. تشترك كل من هذه المواد الخافضة للتوتر السطحي في حقيقة أن جميعها تحتوي على شقوق بولي أوكسي إيثيلين وبالتالي إلى حد أكبر أو أقل، تظهر مشكلة مماثلة، حيث أن بولي أوكسي إيثيلين يتأكسد تلقائياً لإنتاج بيروكسيدات تفاعلية، تسبب زيادة في تولد مناعة بروتينية غير مرغوب فيها. (راجع Edward T. Maggio et al; Polysorbates, peroxides, protein aggregation, immunogenicity - a growing concern; Journal of Excipients and Food Chemicals 3(2):46-53; 2012).
ذُكر PVP لنزع استقرار صيغ الفيروس الحية الضعيفة. (راجع: JA White et al; Development of a stable liquid formulation of live attenuated influenza vaccine; Vaccine Volume 34, Issue 32, 12 July 2016, Pages 3676-3683; 2016).
يُعد تيرهالوز مكلفاً؛ ينبغي إقرانه مع السكريات الأخرى ومواد الإضافة البروتينية (الجيلاتين) لتحقيق الاستقرار. أيضًا، تعد عوامل التثبيت الأخرى أفضل من تيرهالوز لتعزيز استقرار عمر تخزين اللقاح المجفف بالتجميد.
يتسم السوربيتول بدرجة حرارة انتقال زجاج منخفضة (Tg) (-1,6 درجة مئوية)، لذلك لا يمكن استخدامه كمكون أساسي للصيغة. تحد Tg المنخفضة للسوربيتول من استخدامه. يجب أن يقترن السوربيتول مع السكريات ومولد الإضافة البروتينية الأخرى (الجيلاتين) لتحقيق الاستقرار.
بشكل نمطي، يتم تخزين الفيروسات الناتجة عن عودة الارتباط الجيني في صورة كريات مجففة بالتجميد تحتوي على نواتج تحليل كازين و/ أو كولاجين في محلول ملحي فسيولوجي (PBS). ثم يتم إعادة ترطيب هذه الكريات في محلول مقبول صيدلانياً مثل 0,4-0,9% من كلوريد الصوديوم. ومع ذلك، توجد عيوب كبيرة مرتبطة بهذه الصيغ ومعروفة في المجال. ومن بين هذه توجد المكونات غير المحددة بشكل كامل، وإجراءات التحضير المعقدة، والتكلفة العالية، وعدم القدرة على الحفاظ على بعض الخصائص المرغوبة للفيروس.
كانت صيغ لقاح الفيروسة المصفرة المتطورة مسبقًا ثابتة عند 2-8 درجة مئوية لمدة 6 أشهر، 25 درجة مئوية لمدة 7 أيام وعند 37 درجة مئوية لمدة 1-2 يومًا. لا تزال هناك حاجة لتطوير صيغ تتكون أدنى عدد من السواغات وتمنح ثبات حراري طويل المدى للقاحات الفيروسة المصفرة، على وجه الخصوص فيروسات حمى الدنك الناتجة عن عودة الارتباط الجيني/ الخيميرية الحية الضعيفة.
يتم وصف هذه التركيبات/ التصيغ وعملية تحضيرها في هذه الوثيقة.
الكشف عن الاختراع:
يوفر الكشف الحالي تركيبة مولدة للمناعة تشتمل على واحد على الأقل من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة، كربوهيدرات واحدة على الأقل، وحمض أميني واحد على الأقل حيث، تكون التركيبة عُرضة لمعالجات التجفيف بالتجميد السريعة والتركيبة الُمعاد تشكيلها تحتفظ بالخصائص المطلوبة لفيروس، بما في ذلك حيوية الفيروس، تولد المناعة والاستقرار.
يتعلق الكشف الحالي على الأخص بتركيبات مولدة للمناعة مجففة بالتجميد تشتمل على:
أ) فيروس حي ضعيف ناتج عن عودة الارتباط الجيني/ الدنك الخيميري، حيث تشتمل سلالات فيروس الدنك الحية الضعيفة المستخدمة على rDEN1Δ30-1545;rDEN2/4Δ30(ME)-1495, 7163; rDEN3Δ30/31-7164 و rDEN4Δ30-7132, 7163, 8308 التي تم الحصول عليها من المعاهد الصحية الوطنية الأمريكية (NIH).
ب) سكروز حوالي 3% وزن/ حجم إلى حوالي 6% وزن/ حجم
ج) جليسين من حوالي 3% وزن/ حجم إلى حوالي 6% وزن/ حجم
يوفر الكشف الحالي أيضاً طريقة لتصنيع صيغ/ تركيبات اللقاح هذه.
الأهداف
ترد بعض أهداف الكشف الحالي، التي تفي بنموذج واحد على الأقل في هذه الوثيقة، على النحو التالي:
يكمن أحد أهداف الكشف الحالي في تخفيف واحدة أو أكثر من مشاكل المجال السابق أو يوفر على الأقل بديل مفيد.
يكمن هدف آخر للكشف الحالي في توفير تركيبات/ صيغ لقاح مستقرة مجففة بالتجميد تشتمل على فيروسة مصفرة واحدة على الأقل، كربوهيدرات واحدة على الأقل، حمض أميني واحد على الأقل، و اختيارياً قاعدة. حيث، تحافظ التركيبة على الخصائص المرغوبة لفيروس، بما في ذلك حيوية الفيروس، تولد المناعة والاستقرار.
يكمن هدف آخر أيضاً للكشف الحالي في توفير تركيبات/ صيغ لقاح مستقرة مجففة بالتجميد تشتمل ضمن أشياء أخرى على أنماط مصلية لفيروس حي ضعيف ناتج عن عودة الارتباط الجيني/ الدنك الخيميري (DEN 1، DEN 2، DEN 3، DEN 4) مناسبة لعلاج أو الوقاية من عدوى الدنك، أو للوقاية، تخفيف، أو تأخير ظهور أو تطور الأعراض السريرية له.
يكمن هدف آخر أيضاً للكشف الحالي في توفير طريقة لتصنيع صيغ/ تركيبات اللقاح هذه.
تتضح اهداف وفوائد أخرى للكشف الحالي من الوصف التالي، الذي من غير المقرر أن يحد من نطاق الكشف الحالي.
الوصف التفصيلي للاختراع
على الرغم من أن الكشف الحالي يمكن أن يكون عرضة للنماذج المختلفة، يتم توضيح نماذج معينة في الأشكال والمناقشة التفصيلية التالية، مع إدراك أن الكشف الحالي يمكن اعتباره مثالاً على مبادئ الكشف ولا يُقصد منه تقييد نطاق الكشف عن ما هو موضح ومُعلن في هذا الكشف.
وفقاً لنموذج أول من الكشف الحالي، تركيبة مولدة للمناعة تشتمل على واحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة، واحدة أو أكثر من كربوهيدرات، وواحد أو أكثر من حمض أميني حيث، تكون التركيبة عُرضة لمعالجات التجفيف بالتجميد السريعة وتحتفظ التركيبة الُمعاد تشكيلها بالخصائص المطلوبة لفيروس، بما في ذلك حيوية الفيروس، تولد المناعة والاستقرار.
يتم استخدام المصطلح "حي" بمعناه التقليدي، ويكون الفيروس الحي عبارة عن فيروس لم يتم إخماده، أي فيروس قادر على النسخ على خلايا متسامحة. وتُعد الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة عبارة عن فيروس لا يعمل على حث المرض الذي يسببه الفيروس المناظر من النوع البري في الحيوانات أو البشر والقادر على حث استجابة مناعية معينة.
وفقاً لنموذج ثاني من الكشف الحالي، يكون الواحد أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة عبارة عن فيروسات مصفرة ناتجة عن عودة الارتباط الجيني و/ أو فيروسات مصفرة خيميرية.
وفقاً لنموذج ثالث من الكشف الحالي، تُختار واحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة من المجموعة التي تتكون من فيروس الدنك (DEN)، فيروس الحمى الصفراء (YF)، فيروس التهاب الدماغ الياباني (JE)، فيروس Kunjin، فيروس غرب النيل (WN)، فيروس التهاب الدماغ المنقول بالقراد (TBE)، فيروس التهاب الدماغ لـ St. Louis، فيروس التهاب الدماغ بوادي موراي، فيروس زيكا، أو أي فيروس فيروسة مصفرة ذي صلة به.
أيضاً وفقاً للجانب المفضل للنموذج الثالث، تكون واحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة عبارة عن فيروس الدنك (DEN)، اختيارياً العديد من فيروسات الدنك الحية الضعيفة (DEN) من أنماط مصلية مختلفة تُختار من المجموعة التي تتكون من DEN-1، DEN-2، DEN-3 و DEN-4.
وفقاً لنموذج رابع من الكشف الحالي، يتم اختيار واحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة من المجموعة التي تتكون من الحية الضعيفة فيروسات الحمى الصفراء الخيمرية/ الناتجة من عودة الارتباط الجيني (YF) و/ أو فيروسات التهاب الدماغ الياباني (JE) الحية الضعيفة الخيمرية/ الناتجة من عودة الارتباط الجيني، و/ أو فيروسات الدنك الحية الضعيفة الخيمرية/ الناتجة من عودة الارتباط الجيني (DEN)، و/ أو فيروسات غرب النيل الحية الضعيفة الخيمرية/ الناتجة من عودة الارتباط الجيني (WN) و/ أو فيروسات التهاب الدماغ المنقول بالقراد الحية الضعيفة الخيمرية/ الناتجة من عودة الارتباط الجيني (TBE) و/ أو فيروس الدنك الخيمري (فيروس الحمى الصفراء - فيروس الدنك)، و/ أو فيروس YF-WN خيميري (فيروس الحمى الصفراء - فيروس غرب النيل) و/ أو فيروس YF-JE (فيروس الحمى الصفراء - فيروس التهاب الدماغ الياباني) أو أي فيروس فيروسة مصفرة ذي صلة به.
كذلك وفقاً لجانب مفضل من نموذج رابع، تكون واحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة الحية الضعيفة عبارة عن فيروسات الدنك الحية الضعيفة الخيمرية/ الناتج عن عودة الارتباط الجيني (DEN).
وفقاً لنمو ج خامس من الكشف الحالي، يتم أدناه وصف فيروسات الدنك حي ضعيفة ناتجة عن عودة الارتباط الجيني/ الخيميرية المستخدمة في تركيبة مولدة للمناعة:
أ) وصف مختصر لسلالات NIH ناتجة عن عودة الارتباط الجيني/ تشكيلها:
أجريت جميع الأنشطة المتعلقة بتوليد سلالات اللقاح الضعيفة من جميع الأنماط المصلية لفيروس حمى الضنك الأربعة (DEN 1، DEN 2، DEN 3، DEN 4) الموصوفة أدناه في NIH، الولايات المتحدة. تم إدراج محتويات الطلب الدولي رقم WO2002095075 والطلب الدولي رقم WO2008022196 في هذه الوثيقة بأكملها.
أصل الجين
1. تم تطوير كل من السلالة الضعيفة لفيروس حمى الضنك 1-4 (rDEN1Δ30، rDEN2/4Δ30(ME)، rDEN3Δ30/31 & rDEN4Δ30) عن طريق حذف حوالي 30 نيوكليوتيد (Δ30) (31 نيوكليوتيد إضافي (Δ31) في حالة DEN-3) من طرف 3´- غير انتقالي من سلالات من النوع البري. يمكن أيضاً توليد الطفرة ∆31 بمفردها لتمييز مساهمة أي من ∆30 أو ∆31 في طفرة حذف مقترنة ∆30/31.
2. تم تطوير النمط المصلي لفيروس DEN 2 بواسطة استبدال البروتين M وE من النمط المصلي DEN 4 الضعيف مع ذلك الخاص ببروتين DEN 2 M وE.
3. هيكلياً تكون كل السلالات الأربع عبارة عن فيروسات RNA مغلفة في اتجاه نسخ موجب بحجم 35-50 نانو متر.
4. سلالة rDEN1Δ30-1545 المستخدمة في هذه الوثيقة تشفر طفرة Lys→Arg فردية عند عدد وحدة حمض أميني بنائية 484 (طفرة A1545G) في عديد البروتين الفيروسي.
5. سلالة rDEN2/4Δ30(ME)-1495, 7163 المستخدمة في هذه الوثيقة تشفر طفرة Ser→Phe فردية عند عدد وحدة حمض أميني بنائية 186 (طفرة C1495T) وطفرة Leu→Phe فردية عند عدد وحدة حمض أميني بنائية 112 (طفرة A7163C) في عديد البروتين الفيروسي.
6. يتضمن rDEN3Δ30/31 حذف Δ30 الأصلي وحذف نيوكلوتيد 31 غير متجاور يعمل على إزالة كل من البنى TL-2 وTL-3. سلالة rDEN3Δ30/31-7164 الناتجة المستخدمة في هذه الوثيقة تُشفر شفرة Val→Ala عند عدد وحدة حمض أميني بنائية 115 (طفرة T7164C) في عديد البروتين الفيروسي.
7. سلالة rDEN4Δ30-7132, 7163, 8308 المستخدمة في هذه الوثيقة تشفر طفرة Thr→Ile عند وحدة حمض أميني بنائية رقم 102 (طفرة C1495T) وطفرة Leu→Phe عند وحدة حمض أميني بنائية رقم 112 (طفرة A7163C) وطفرة عند Lys→Arg وحدة حمض أميني بنائية رقم 249 (طفرة A8308G) في عديد البروتين الفيروسي.
الأشكال تصف متوالية RNA وبنية الفيروس لسلالات لقاح DEN:
راجع الشكل 1، 2 و3
يتم التعبير عن سلالات من النوع البري المستخدمة لتوليد سلالات لقاح في الجدول الوارد أدناه:
الجدول 1: تسمية سلالات من النوع البري وسلالات اللقاح
النمط المصلي سلالة من النوع البري سلالة لقاح
DEN 1 سلالة Western Pacific rDEN1∆30-1545
DEN 2 سلالة New Guinea rDEN2/4∆30(ME)-1495,7163
DEN 3 Sleman/78 rDEN3∆30/31-7164
DEN 4 Dominica rDEN4∆30-7132,7163,8308
أ) إجراء التحويل:
لتوليد سلالات لقاح فيروس الدنك بصورة أساسية تم اتباع الخطوات التالية-
1. تم إنشاء بلازميد يحتوي على نسخة cDNA كاملة الطول لفيروس DEN من النوع البري بواسطة توليد أجزاء DNA قصيرة باستخدام ترانسكريبتاز عكسي وPCR. تم إلحاق الأجزاء التي تم الحصول عليها بصورة ملائمة لتوليد DNA سليم مزدوج الجديلة يشتمل على جديلة DNA الجينومي كامل الطول لـ DEN من النوع البري الذي تم تشكيل نسيلة منه في بلازميد.
2. تم إدراج طفرة ∆30 بواسطة تشكيل طفرات من الجزء الفرعي لـ 3’UTR واستبدال 3’UTR لـ DEN من النوع البري بالجزء الفرعي الذي يحتوي على المنطقة ∆30. تم إدخال طفرات محددة بواسطة تولد طفرات PCR محدد بالموقع.
3. لتوليد سلالة لقاح DEN 2 تم تشكيل نسائل من جينات هيكلية M وE، لـ DEN 2 في بلازميد واستخدامها لاستبدال الجينات الهيكلية في بلازميد DEN 4 تم تشكيل نسائل منه يحتوي على طفرة ∆30. لتوليد سلالة لقاح DEN 3 تم إدخال اثنين من عمليات حذف نيوكلوتيدات 30 و31 في نسيلة من النوع البري.
4. تم تخليق منتسخات RNA جينومية مغلفة الطول من بلازميدات خطية باستخدام طاقم AmpliCap SP6 Message Maker (EpiCentre Technologies, Madison) وRNA المنقى باستخدام طاقم the RNeasy Mini (Qiagen, Valencia, CA). تم نقل العدوى إلى خلايا Vero (C6/36 للدنك 3) باستخدام منتسخات RNA نقية باستخدام كواشف نقل العدوى DOTAP الشحمية (Roche, Indianapolis, IN) لاستخلاص الفيروس المطلوب. تم إخضاع الفيروسات التي تم الحفاظ عليها إلى التكبير، تشكيل نسائل بالتخفيف الطرفي والتضخيم النهائي لتوليد نواة الفيروس في خلايا Vero. يتم ذكر تفاصيل حول عدد دورات التضخيم والتخفيف الطرفي التي يتم إجرائها لكل سلالة في جدول أدناه في الجدول 2.
الجدول 2: دورة تضخيم وتخفيف طرفي لتحضير نواة الفيروس
سلالة الفيروس DEN 1 DEN 2 DEN 3 DEN 4
تم الحفاظ عليها في Vero Vero C6/36* Vero
التضخيم Nil Nil 6X 3X
نسائل بالتخفيف الطرفي 2X 2X 3X 3X
التضخيم 2X 2X 2X 2X
* تم تنفيذ كل عمليات تشكيل النسائل الأخرى بالتضخيم والتخفيف الطرفي في خلايا Vero.
وفقاً لجانب أول من النموذج الخامس، تتسم الفيروسات الخيمرية بالخصوصية لإظهار خصائص الفيروسات الحية الضعيفة على النحو المحدد أعلاه. من الممكن بالتالي أيضاً، في سياق الكشف، استخدام أي فيروس خيمري يعبر عن بروتين الغلاف أو واحدة أو أكثر من القمم اللاصقة لواحد أو أكثر من بروتين (بروتينات) الغلاف لواحدة أو أكثر من الفيروسات المصفرة وحث استجابة مناعية معينة تشتمل على أجسام مضادة تعمل على تعادل السلالة، أو واحدة على الأقل من السلالات، التي يتم منها اشتقاق بروتين الغلاف أو s القمة اللاصقة المذكورة.
وفقاً لجانب ثاني من النموذج الخامس، يشتمل الحمض النووي لفيروس الدنك الحي الضعيف الناتج عن عودة الارتباط الجيني أيضاً على طفرة لتوليد جزء طافر له نمط ظاهري يُختار من المجموعة التي تتكون من حساسية درجة الحرارة في خلايا Vero أو سلالة خلية كبد بشرية HuH-7، تقييد خلية عائلة في خلايا البعوض أو سلالة خلية كبدية بشرية HuH-7، تكيف خلية عائلة لنسخ متطور في خلايا Vero، أو الإضعاف في الفئران أو القرود، حيث يتم اختيار التركيبة التي تشمل عضو من المجموعة التي تتكون من:
(1) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(2) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(3) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(4) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(5) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(6) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(7) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(8) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(9) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(10) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(11) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(12) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(13) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(14) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(15) rDEMΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(16) rDENlΔ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(17) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(18) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(19) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(20) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(21) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(22) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(23) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(24) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(25) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(26) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(27) rDEMΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(28) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(29) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(30) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(31) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(32) rDENlΔ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(33) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(34) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(35) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(36) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(37) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(38) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(39) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(40) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(41) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(42) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(43) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(44) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(45) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(46) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(47) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(48) rDENlΔ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(49) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(50) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(51) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(52) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(53) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(54) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(55) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(56) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(57) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(58) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(59) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(60) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(61) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(62) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(63) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(64) rDENlΔ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(65) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(66) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(67) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(68) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(69) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(70) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(71) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(72) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(73) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(74) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(75) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(76) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(77) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(78) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(79) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30, i
(80) rDENl/2Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(81) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(82) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(83) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(84) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(85) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(86) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(87) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(88) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(89) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30, ι
(90) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(91) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(92) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ305 rDEN4/3Δ30,
(93) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(94) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(95) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(96) rDENl/2Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(97) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(98) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(99) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30, ι
(100) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(101) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(102) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(103) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(104) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(105) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(106) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(107) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(108) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(109) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(110) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(111) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(112) rDENl/2Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(113) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(114) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(115) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(116) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(117) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(118) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(119) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(120) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(121) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ305 rDEN4Δ30,
(122) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(123) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(124) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(125) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(126) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(127) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(128) rDENl/2Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(129) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(130) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(131) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(132) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(133) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(134) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(135) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(136) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(137) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(138) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(139) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(140) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(141) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(142) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(143) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(144) rDENl/3Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(145) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(146) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(147) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(148) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(149) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(150) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(151) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(152) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(153) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(154) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(155) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(156) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(157) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(158) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(159) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(160) rDENl/3Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(161) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(162) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(163) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(164) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(165) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(166) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(167) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(168) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(169) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(170) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(171) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(172) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(173) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(174) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(175) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(176) rDENl/3Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(177) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(178) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(179) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(180) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(181) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(182) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(183) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(184) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(185) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(186) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(187) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(188) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(189) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(190) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(191) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(192) rDENl/3Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(193) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(194) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(195) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(196) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(197) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(198) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(199) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(200) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(201) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(202) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(203) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(204) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(205) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(206) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(207) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(208) rDENl/4Δ30, rDEN2Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(209) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(210) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(211) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(212) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(213) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(214) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(215) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(216) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(217) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(218) rDENl/4Δ305rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(219) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(220) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(221) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(222) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(223) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ305 rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(224) rDENl/4Δ30, rDEN2/lΔ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(225) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(226) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(227) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(228) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(229) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(230) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(231) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(232) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(233) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(234) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(235) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(236) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(237) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(238) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(239) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(240) rDENl/4Δ30, rDEN2/3Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30,
(241) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4Δ30,
(242) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/lΔ30,
(243) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/2Δ30,
(244) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3Δ30, rDEN4/3Δ30,
(245) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4Δ30,
(246) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/lΔ30,
(247) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/2Δ30,
(248) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/lΔ30, rDEN4/3Δ30,
(249) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4Δ30,
(250) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/lΔ30,
(251) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/2Δ30,
(252) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/2Δ30, rDEN4/3Δ30,
(253) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4Δ30,
(254) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/lΔ30,
(255) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/2Δ30,
(256) rDENl/4Δ30, rDEN2/4Δ30, rDEN3/4Δ30, rDEN4/3Δ30. و
وفقاً لنموذج سادس من الكشف الحالي، تتضمن واحدة أو أكثر من كربوهيدرات، على سبيل المثال لا الحصر، كربوهيدرات طبيعية، كربوهيدرات تخليقية، كحولات عديدة الهيدروكسيل، سكريات أولية لعوامل تسهيل الانتقال الزجاجي، سكريات ثانوية، سكريات ثلاثية، سكريات قليلة والكحولات السكرية المناظرة منها، مركبات عديد الهيدروكسيل مثل مشتقات كربوهيدرات وكربوهيدرات مُعدلة كيميائياً، نشا هيدروكسي إيثيل وبوليمرات السكر المشتركة. يُعد كل من الكربوهيدرات الطبيعية والتخليقية مناسباً للاستخدام. تتضمن الكربوهيدرات التخليقية، على سبيل المثال لا الحصر، تلك التي بها رابطة جليكوسيد مستبدلة بثيول أو رابطة كربون. يمكن استخدام كل من الصور D وL للكربوهيدرات. يمكن أن تكون الكربوهيدرات غير اختزالية أو اختزالية. عند استخدام كربوهيدرات اختزالية، يفضل إضافة مثبطات تفاعل Maillard. تتضمن الكربوهيدرات الاختزالية المناسبة للاستخدام في التركيبة على تلك المعروفة في المجال وتتضمن، على سبيل المثال لا الحصر، جلوكوز، سكروز، مالتوز، لاكتوز، فركتوز، جالاكتوز، مانوز، مالتولوز ولاكتولوز. تتضمن كربوهيدرات غير اختزالية، على سبيل المثال لا الحصر، جليكوسيدات غير اختزالية من مركبات عديدة الهيدروكسيل تُختار من كحولات سكر وكحولات أخرى عديدة الهيدروكسيل مستقيمة السلسلة. تتضمن كربوهيدرات أخرى مفيدة رافينوز، ستاكيوز، ميليزيتوز، دكستران، سيليبيوز، مانوبيوز وكحولات سكر. تكون جليكوسيدات كحول السكر بشكل مفضل عبارة عن مونو جليكوسيد، على وجه الخصوص المركبات التي تم الحصول عليها بواسطة اختزال سكريات ثانوية مثل لاكتوز، مالتوز، لاكتولوز ومالتولوز. يتم اختيار عامل تشكيل الزجاج من المجموعة التي تتكون من سكروز، مانيتول، تيرهالوز، مانوز، رافينوز، لاكتيتول، حمض لاكتينوبيونيك، جلوكوز، مالتولوز، أيزو-مالتولوز، مالتوز، لاكتوز سوربيتول، دكستروز، فيوكوز أو توليفة منها.
أيضاً وفقاً للجانب المفضل للنموذج السادس، تشتمل تركيبة مولدة للمناعة على سكروز في صورة مثبت كربوهيدرات مناسب يتراوح بين 1% و20% وزن/ حجم، بشكل مفضل بين 1-10%، على نحو مفضل أكثر بين 3-6%، بشكل أكثر تفضيلاً أقل من أو يساوي 5% (وزن/ حجم).
وفقاً لنموذج سابع من الكشف الحالي، يتضمن الواحد أو أكثر من حمض أميني، على سبيل المثال لا الحصر، ليوسين، أيزو- ليوسين، هيستيدين، جليسين، جلوتامين، آرجينين، ليسين، آلانين أو توليفة من أحماض أمينية، ببتيد، بروتين متحلل أو بروتين مثل ألبيومين مصل.
أيضاً وفقاً للجانب المفضل للنموذج السابع، تشتمل تركيبة مولدة للمناعة على جليسين بمثابة مثبت حمض أميني مناسب يتراوح بين 1% و20% وزن/ حجم، بشكل مفضل بين 1-10%، على نحو مفضل أكثر بين 3-6%، بشكل أكثر تفضيلاً أقل من أو يساوي 5% (وزن/ حجم).
وفقاً لنموذج ثامن من الكشف الحالي، يمكن أن تشتمل تركيبة مولدة للمناعة بالإضافة إلى ذلك على عامل تنظيم يُختار من المجموعة التي تتكون من عوامل تنظيم كربونات، فوسفات، سيترات، لاكتات، جلوكونات وطرطرات، وكذلك عوامل تنظيم عضوية أكثر تعقيداً بما في ذلك عامل تنظيم فوسفات يحتوي على فوسفات صوديوم و/ أو فوسفات بوتاسيوم بنسبة تُختار لتحقيق pH المطلوب. في مثال آخر، يحتوي عامل التنظيم على تريس (هيدروكسي ميثيل) أمينو ميثان، أو "تريس"، متكون لتحقيق pH المطلوب. أيضاً في مثال آخر، يمكن أن يكون عامل التنظيم عبارة عن أدنى وسط أساسي به أملاح Hanks.
وفقاً لنموذج تاسع من الكشف الحالي، يمكن أن تشتمل تركيبة مولدة للمناعة بالإضافة إلى ذلك على مادة حافظة تُختار من المجموعة التي تتكون من 2- فينوكسي إيثانول، كلوريد بنزونيوم (فيميرول)، فينول، m- كريسول، ثيوميرسال، فورمالدهايد، ميثيل وبروبيل بارابينات، كلوريد بنزالكونيوم، كحول بنزيل، كلوروبيوتانول، p-كلور-m- كريسول، أو كحول بنزيل أو توليفة منها.
وفقاً لنموذج عاشر من الكشف الحالي، يمكن أن تشتمل تركيبة مولدة للمناعة بالإضافة إلى ذلك على سواغات مقبولة صيدلانياً تُختار من المجموعة التي تتكون من خوافض توتر سطحي، البوليمرات والأملاح. يمكن أن تتضمن أمثلة خوافض التوتر السطحي خوافض توتر سطحي غير أيونية مثل بولي سوربات 20، بولي سوربات 80، وما إلى ذلك. يمكن أن تتضمن أمثلة البوليمرات دكستران، كربوكسي ميثيل سليولوز، حمض هيالورنيك، دكسترين حلقي، وما إلى ذلك. يمكن أن تتضمن أمثلة الأملاح NaCl، MgC12، KCl، CaC12، وما إلى ذلك.
وفقاً لنموذج حادي عشر من الكشف الحالي، يمكن أن تشتمل تركيبة مولدة للمناعة بالإضافة إلى ذلك على مساعد يُختار من المجموعة التي تتكون من ملح ألمنيوم، هيدروكسيد ألمنيوم، فوسفات ألمنيوم، فوسفات هيدروكسي ألمنيوم، و كبريتات بوتاسيوم ألمنيوم.
وفقاً لنموذج ثاني عشر من الكشف الحالي، يمكن أن تشتمل التركيبة المولدة للمناعة بالإضافة إلى ذلك على مكون تحفيز مناعي يُختار من المجموعة التي تتكون من: مستحلب زيت وماء، MF-59، جسيم شحمي، عديد سكاريد شحمي، صابونين، مركب شحمي A، مشتقات مركب شحمي A، مونو فوسفوريل لمركب شحمي A، 3– مونو فوسفوريل لمركب شحمي A منزوع الأسيل، AS01، AS03، قليل النيوكلوتيد، يشتمل قليل النيوكلوتيد على CpG واحد على الأقل غير معالج بميثيل و/ أو جسيم شحمي، مساعد Freund’s، مساعد Freund’s كامل، مساعد Freund’s غير كامل، البوليمرات، البوليمرات المشتركة مثل البوليمرات المشتركة بولي أوكسي إيثيلين - بولي أوكسي بروبيلين، بما في ذلك البوليمرات الكتلية المشتركة، بوليمر p1005، مساعد CRL-8300، موراميل داي ببتيد، محفزات TLR-4، فلاجيلين، فلاجلين مشتق من بكتريا سالبة الجرام، محفزات TLR-5، شظايا فلاجلين قادرة على الارتباط بمستقبلات TLR-5، QS-21، ISCOMS، توليفة صابونين مع ستيرول وشحوم.
وفقاً لنموذج ثالث عشر من الكشف الحالي، يتم تجفيد التركيبة المذكورة المولدة للمناعة (تجفيفها بالتجميد).
وفقاً لنموذج رابع عشر من الكشف الحالي، تُعد التركيبة المولد للمناعة المجفدة مناسبة عند 2-8 درجة مئوية من 12 إلى 36 شهر؛ عند 25 درجة مئوية من 2 إلى 6 شهر؛ عند 37 درجة مئوية من 1 أسبوع إلى 4 أسابيع، عند 42 درجة مئوية لمدة 2-7 أيام، عند 55 درجة مئوية لمدة 2-7 أيام.
وفقاً لنموذج خامس عشر من الكشف الحالي، طريقة لإعادة إنشاء تركيبة مولدة للمناعة مجفدة تشتمل على خطوة إعادة إنشاء التركيبة المولد للمناعة المجفدة مع محلول مائي اختيارياً محلول ملحي أو ماء للحقن (WFI).
وفقاً لنموذج سادس عشر من الكشف الحالي، يتراوح pH النهائي للتركيبة المولدة للمناعة بعد إعادة الإنشاء من pH يبلغ 6,0 إلى pH يبلغ 8,0؛ على نحو مفضل أكثر يتراوح من pH يبلغ 7,0 إلى pH يبلغ 8,0؛ على نحو مفضل أكثر يتراوح من pH يبلغ 7.2 إلى pH يبلغ 7.9؛ وبشكل أكثر تفضيلاً يتراوح من pH يبلغ 7.5 إلى pH يبلغ 7.9.
وفقاً لنموذج سابع عشر من الكشف الحالي، تشتمل عملية لتحضير تركيبة لقاح فيروس الدنك ثلاثي التكافؤ الحي الضعيف الخيمري/ الناتج عن عودة الارتباط الجيني (DEN) على أي مجموعة فرعية أو كل من الخطوات التالية:
أ) تم إحياء خلايا Vero وتهيئتها للنمو في أدنى وسط أساسي (MEM) مع محلول ملح Hank’s و10% مصل بقري جنيني
ب) تم في البداية تضخيم خلايا Vero في دوارق مزرعة نسيج (TCF مع مساحة سطح 175 سم2 متاحة لنمو الخلية) لإنتاج مصارف رئيسية ومصارف التشغيل لخلايا Vero
ج) تم إحياء خلايا محفوظة بالتبريد من مصرف خلية المعالجة، تكبيرها وتمريرها أيضاً في زجاجات اسطووانية (مساحة سطح 850 سم2 متوفرة لنمو الخلية) وحضانتها عند 37±1° م للحصول على طبقات أحادية
د) تم نقل العدوى إلى طبقات أحادية من خلية Vero في زجاجات اسطوانية مع نواةتشغيل للأنماط المصلية لفيروس الدنك 1، 2، 3 و 4
ه) تمت حضانة كل الزجاجات الاسطوانية عند 34±1° م لمدة 20 دقيقة؛ وقمة حجمية تصل إلى 120 ملي لكل RB باستخدام أدنى وسط أساسي (MEM) مع محلول ملح Hanks و2% مصل بقري جنيني. تم أيضاً حضانة كل الزجاجات الاسطوانية عند 34±1° م لمدة 2 يوم وسرعة دوران 0,7 لفة في الدقيقة.
و) في اليوم 2، تم غسل طبقات أحادية في زجاجات اسطوانية باستخدام وسط فيروس جديد خالي من مصل بقري جنيني وتمت حضانة RBs عند 34±1° م لمدة 3 أيام لكل منهما عند سرعة دوران 0,7 لفة في الدقيقة.
ز) في اليوم الخامس بعد العدوى تم حصاد كل المواد الطافية للخلية من كل الزجاجات الاسطوانية التي تم نقل العدوى لها وتتم إعادة ملء الزجاجات بوسط فيروس جديد خالي من مصل بقري جنيني؛
ح) تم أخذ العديد من المكونات الناتجة ومعالجتها بصورة منفصلة للحصول على أحواض فيروس نقية أحادية التكافؤ (CMVPs)
ط) ترشيح الناتج الفيروسي بواسطة الترشيح بالتدفق المباشر (DFF) من خلال مرشح تصفية واحد على الأقل
ي) معالجة الناتج الفيروسي مع نيوكلاز داخلي غير نوعي لتحلل DNA الخلوي
ك) تم إخضاع الناتج الفيروسي الذي تمت معالجته إلى الترشيح بالتدفق المماسي
ل) تثبيت الناتج الفيروسي بعامل تثبيت يشتمل على حمض أميني واحد على الأقل وكربوهيدرات واحد على الأقل لتشكيل ناتج فيروسي ثابت
م) تعقيم الناتج الفيروسي الثابت بواسطة DFF من خلال مرشح للتعقيم واحد على الأقل
ن) تم تخزين أحواض فيروس نقية أحادية التكافؤ (CMVPs) لكل من النمط المصلي لفيروس الدنك في زجاجات بولي كربونات عند -60° م أو أقل
س) تم خلط أحواض فيروس نقية أحادية التكافؤ (CMVPs) لكل من الأنماط المصلية الأربع للفيروس معاً للحصول على كتلة نهائية يتم تعبئتها في قنينات وتجفيدها للحصول على منتج العقار أي لقاح فيروس الدنك ثلاثي التكافؤ الناتج عن عودة الارتباط الجيني (الحية الضعيفة)
وفقاً لجانب أول من النموذج السابع عشر، كانت سلالة خلية Vero المستخدمة عبارة عن ATCC CCL-81 (cGMPVero، خلايا كُلى مشتقة من القرد الأخضر الأفريقي (Cercopithecus aeothiops؛ متوفر من the ATCC, Manassas, Va., USA)
وفقاً لجانب ثاني من نموذج سابع عشر، تم تنفيذ العديد من النواتج عند فاصل زمني ملائم لحوالي 4-5 - مرات على نحو مفضل أكثر 4 مرات في اليوم الخامس 5، اليوم السابع، اليوم التاسع واليوم الحادي عشر قبل نبذ مادة الإدخال ومعالجتها بصورة منفصلة للحصول على أحواض فيروس نقية أحادية التكافؤ (CMVPs). في حالة النواتج المختلفة تسهم نفس كمية مادة الإدخال في ناتج أكبر مقارنةً بطريقة الحصاد الفردية التقليدية. يعمل هذا أيضاً على توفير الوقت وتكلفة الإنتاج الإجمالية للمعالجة القبلية أي تضخيم الخلايا للعدوى.
وفقاً لجانب ثالث من النموذج السابع عشر، حيث يشتمل وسط الفيروس على أدنى وسط أساسي (MEM) مع محلول ملح Hanks يحتوي بالإضافة إلى ذلك على دكستروز، L- جلوتامين وبيكربونات صوديوم.
وفقاً لجانب رابع من النموذج السابع عشر، تتم تنقية الوسط الذي يحتوي على الفيروس، بشكل نمطي من خلال مرشحات لخفض الأحجام المسامية (على سبيل المثال، 6 ميكرو، 0.8 ميكرو، 0,45 ميكرو، 0,2 ميكرو). تُعرف المرشحات المناسبة المتاحة تجارياً ووسائل الترشيح جيداً في المجال ويمكن اختيارها بواسطة هؤلاء المهرة. تتضمن وسائل الترشيح التوضيحية، على سبيل المثال، وسائل ترشيح Millipak (Millipore)، Kleenpak (Pall) وSartobran™ P.
وفقاً لجانب خامس من نموذج سابع عشر، تمت معالجة الناتج المرشح بنيوكلاز داخلي غير نوعي بشكل أكثر تفضيلاً بنزوناز مع تركيز يتراوح بين 1-10 وحدة/ملي، عند درجة حرارة تتراوح بين 4-37°م، ولفواصل تتراوح بين 2 ساعتين إلى 12 ساعة.
وفقاً لجانب سادس من النموذج السابع عشر، تم أيضاً إخضاع الناتج الذي تمت معالجته بالبنزوناز إلى ترشيح بالتدفق المماسي (TFF) بشكل نمطي من خلال مرشحات بقطع له وزن جزيئي (MWCO) يبلغ 500 كيلو دارسي، على نحو مفضل أكثر 300 كيلو دارسي بشكل أكثر تفضيلاً 100 كيلو دارسي.
وفقاً لجانب سابع من النموذج السابع عشر، تم إخضاع الناتج الفيروسي إلى الترشيح بالتدفق المماسي (TFF) الذي يؤدي إلى 10× على الأقل من تركيز ناتج الحصاد الفيروسي ويؤدي أيضاً إلى إزالة الشوائب المتبقية.
وبشكل مفضل أيضاً تشتمل الشوائب المتبقية على DNA المتبقي، ألبيومين مصل بقري متبقي (BSA) وبروتين خلية عائلة متبقي.
وفقاً لجانب ثامن من النموذج السابع عشر، تؤدي العملية الموصوفة أعلاه إلى مستحضر الفيروسة المصفرة النقي والمركز على نحو مفضل أكثر مستحضر فيروس الدنك حيث، تشتمل المستحضرات على جسيمات فيروس الدنك المركزة الحية الضعيفة، بقايا DNA الخلوي المتبقي (
أنجليزي إلى عربي: Military Contract General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: القانون: العقود
لغة نص المصدر - أنجليزي pdf
ترجمة - عربي الملحق (ب)
سند ضمان حسن الأداء
إلى: [المستفيد]
خطاب الضمان رقم: [الرقم]
نضمن نحن، [اسم البنك]، بشكل غير مشروط وغير قابل للإلغاء أن ندفع لك مبلغ مليوني وخمسمائة وثلاثة وثمانين ألف وثلاثمائة وأربعة وثلاثين دولار أمريكي (2,583,334.00 دولار أمريكي) بما يمثل نسبة 5% من قيمة العقد المبرم بواسطة شركة هوكربيتشكرافت (المُشار إليها فيما يلي باسم "البائع") و****** (المُشار إليها فيما يلي باسم "المشتري") برقم [رقم العقد] بتاريخ [تاريخ العقد] (المُشار إليه فيما يلي باسم "العقد") وفقًا لما يلي:
(أ) عند استلام طلب مكتوب منك بصرف النظر عن الاعتراض من أي طرف آخر، ندفع لك فورًا المبلغ أعلاه أو المبالغ الأخرى التي يمكن أن تطلب منا دفعها، شريطة ألا تتخطى هذه المبالغ الإجمالي المذكور أعلاه، والذي قدره 2,583,334.00 دولار أمريكي عن طرق تحويله إلى حسابك البنكي لدى أي بنك في ******أو عبر أي طريقة أخرى مقبولة لديك.
(ب) أي مبالغ تم دفعها وفقًا لطلبك يجب أن تكون خالصة ومحررة من أي أعباء وبدون أي خصومات حالية أو مستقبلية مثل الضرائب على الدفع أو رسوم أو مصروفات أو إقطاعات أو خصومات أو اقتطاعات من أي نوع كان أو بواسطة أي كيان كان.
(ج) يُعدل المبلغ الذي يزيد عن 2,583,334.00 دولار أمريكي عند طلب البائع، وبدون تأكيد من المشتري أو طرف آخر بالطرق التالية:
(د) تكون الالتزامات المقدمة بموجب هذا الضمان (غير قابلة للنقض وغير مشروطة) التزامًا مباشرًا علينا. ولا نُعفى من جميع أو أي من هذه الالتزامات لأي سبب، بصرف النظر عن طبيعته أو أصله مثل التغيير في شروط العقد أو التمديد أو التغيير في مدى العمل المطلوب تنفيذه وطبيعته أو عدم تنفيذه أو اتخاذ أي إجراءات أو تدابير من طرفكم أو أي طرف ثالث يمكن أن تعفينا أو تحررنا من تنفيذ التزاماتنا ومسؤولياتنا المذكورة في هذا الضمان.
(ه) يظل هذا الضمان صالحًا حتى نهاية [اليوم] [الشهر] [العام] (المُشار إليه فيما يلي باسم "تاريخ الانتهاء"). ويُعتبر هذا الضمان ممتدًا بشكل تلقائي بدون تعديل لمدة عام من تاريخ الانتهاء أو أي تاريخ انتهاء مستقبلي، ما لم نبلغك بواسطة السويفت أو البريد المسجل أو خدمة النقل أن هذا الضمان لن يتم تجديده لأي فترة إضافية قبل عشر (10) أيام على الأقل من هذا التاريخ.
(و) نقر ونؤكد أن قيمة هذا الضمان لا تتخطى نسبة 20% من رأس المال المدفوع لهذا البنك والاحتياطات الرأسمالية الخاصة به.
(ز) يجب تحويل أي نزاع يخص هذا الضمان فقط إلى الهيئات المختصة وفقًا للقوانين واللوائح والتعليمات المذكورة في المملكة العربية السعودية.
___________________
[البنك]
المفوض بالتوقيع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ج) خطاب الاعتماد –نموذج عينة
شروط خطاب اعتماد بالدولار الأمريكي
يتم تحديده بواسطة ******
نفتح بموجب هذه الشروط خطاب اعتماد مستندي وغير قابل للنقض وغير قابل للنقل (مع موافقة الحكومة) برقم __________ بالدولار الأمريكي ليكون صالحًا حتى ____________ لصالح ____________، مع تمويل خطاب الاعتماد مبدئيًا بمبلغ واحد وخمسين مليون وستمائة وستة وستين ألف وستمائة وسبعة وستين دولار أمريكي (51,666,667.00 دولار أمريكي) مغطيًا أربع (4) طائرات جديدة من فئة كينج أير 350 إي أر مع كامل المحركات والمعدات وقطع الغيار وخدمات الدعم الفني وخدمات التدريب والصيانة المذكورة في العقد رقم ___________ (المُشار إليها فيما يلي باسم "العقد")، ويمكن دفع المبلغ المسحوب بموجب خطاب الاعتماد هذا عند تقديم سند إذني واجب الدفع عند الطلب موقعًا من قبل ____________ (المُشار إليها فيما يلي باسم ___________) المدعومة بواسطة العديد من الوثائق و/أو الإقرارات المحددة في الفئات التالية التي يُسمح مقابلها السحب بواسطة البند والفقرة المشار إليهما بشكل خاص في العقد المذكور.
1.1. السندات الإذنية واجبة الدفع عند الطلب ذات الصلة بالمعاملات المنفذة بموجب العقد رقم ________ يجب أن يتم دعمها في جميع الحالات بواسطة فاتورة تجارية من المتعهد.
1.2. تكلفة و/أو فئة رسوم واحدة أو أكثر من المعمول بها التالية يتم تحديدها بوضوح في كل فاتورة:
1.2.1. شحن التوريدات وتسليم رسومات الخدمة مع تكاليف النقل ذات الصلة التي تمثل قيمة البيع الكاملة والتامة للحكومة مقابل تكاليف الخدمة والتوريد والنقل المعمول بها المذكورة في هذا العقد.
1.2.2. مبلغ تسوية فسخ العقد، إن وجد.
1.2.3. الضرائب أو الرسوم ******المدفوعة بواسطة المتعهد، إن وجد.
1.3. يُرفق بفاتورة المتعهد أو يُشمل فيها الإقرارات والمستندات المحددة في الفئات المذكورة أدناه:
1.3.1. الشحن (التوريدات)/ تسليم رسومات (الخدمة) قطع الغيار وخدمات الدعم الفني، وخدمات الصيانة والتدريب، والخدمات الأخرى سبب الشحن/ التسليم، بالإضافة إلى الفاتورة الأصلية للمتعهد (أو في حالة الشحن الجزئي، نسخة أصلية معتمدة منها تشير إلى الشحن، يُقدم معها الأصلية).
1.3.1.1. البضائع المنقولة تجاريًا، شهادة المنشأ من المتعهد أو مورد المتعهد، والإيصال الأصلي لمرسلي الشحنة.
1.3.1.2. وفيما يخص البضائع التي تنقلها الطائرات المملوكة للقوات ******، إيصال موقع من الطيار الحكومي للطائرة الحكومية أو ممثله.
1.3.1.3. نموذج المواد المسلمة عبر البريد: نسخة من إيصال الاستلام للمواد من الحكومة.
1.3.1.4. وفيما يخص الخدمات: عبر إيصال استلام من الحكومة.
1.3.2. خدمات أو مشتريات خاصة أخرى: أمر شراء حكومي أو خطاب تعليمات، ونسخة من فاتورة المورد، وإيصال الاستلام من الحكومة، إن وجد.
1.3.3. الزكاة و/أو ضريبة الدخل: إقرار إدارة الضرائب أو شهادة إعفاء ضريبي تشهد بدفع الضرائب مصاحبة لفاتورة المتعهد.
1.3.4. الرسوم الإضافية:
1.3.4.1. قائمة مفصلة على فاتورة المتعهد بخصوص طبيعة كل الرسوم موضحة الرقم المرجعي للمادة وقيمتها، ويجب أن تصاحب هذه القائمة نسخ من فواتير الشحن لمورد التثبيت، إن وجدت.
1.3.4.2. في حالة رسوم شحن دولية، نسخة واحدة تامة من بوليصة الشحن/ فاتورة النقل الجوي التي تشير إلى المواد المشحونة، وكذلك تكاليف هذا الشحن.
1.3.4.3. في حالة التأمين الدولي، نسخة من شهادة التأمين مشيرة إلى المادة المؤمن عليها، وكذلك تكلفة التأمين. (ملاحظة: يُطلب من المتعهد التأمين فقط عند الطلب بشكل خاص كتابةً بواسطة الحكومة).
1.4. إن أمكن، يرسل المتعهد إلى البنك "قائمة ملخص" لكل شحنة تحتوي على المعلومات التالية في شكل أعمدة:
(أ) رقم شهادة المنشأ
(ب) رقم وتاريخ بوليصة الشحن/ فاتورة النقل الجوي/ فاتورة البيع
(ج) رقم فاتورة المتعهد
(د) قيمة فاتورة المتعهد
(ه) رقم أمر الشراء من المتعهد أو رقم العقد
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (د)
ضمان الدفعة المقدمة
إلى: [المستفيد]
خطاب الضمان رقم: [الرقم]
نضمن نحن، [اسم البنك]، بشكل غير مشروط وغير قابل للنقض أن ندفع لك مبلغ مليوني وخمسمائة وثلاثة وثمانين ألف وثلاثمائة وأربعة وثلاثين دولار أمريكي (2,583,334.00 دولار أمريكي) بما يمثل نسبة 5% من قيمة العقد المبرم بواسطة شركة هوكربيتشكرافت (المُشار إليها فيما يلي باسم "البائع") و****** (المُشار إليها فيما يلي باسم "المشتري") برقم [رقم العقد] بتاريخ [تاريخ العقد] (المُشار إليه فيما يلي باسم "العقد") وفقًا لما يلي:
(أ) عند استلام طلب مكتوب منك بصرف النظر عن الاعتراض من أي طرف آخر، ندفع لك فورًا المبلغ أعلاه أو المبالغ الأخرى التي يمكن أن تطلب منا دفعها، شريطة ألا تتخطى هذه المبالغ الإجمالي المذكور أعلاه، والذي قدره 2,583,334.00 دولار أمريكي عن طرق تحويله إلى حسابك البنكي لدى أي بنك في ******أو عبر أي طريقة أخرى مقبولة لديك.
(ب) أي مبالغ تم دفعها وفقًا لطلبك يجب أن تكون خالصة ومحررة من أي أعباء وبدون أي خصومات حالية أو مستقبلية مثل الضرائب على الدفع أو أو رسوم أو مصروفات أو إقطاعات أو خصومات أو اقتطاعات من أي نوع كان أو بواسطة أي كيان كان.
(ج) يُعدل المبلغ الذي يزيد عن 2,583,334.00 دولار أمريكي عند طلب البائع، وبدون تأكيد من المشتري أو طرف آخر بالطرق التالية:
(د) تكون الالتزامات المقدمة بموجب هذا الضمان (غير قابلة للنقض وغير مشروطة) التزامًا مباشرًا علينا. ولا نُعفى من جميع أو أي من هذه الالتزامات لأي سبب، بصرف النظر عن طبيعته أو أصله مثل التغيير في شروط العقد أو التمديد أو التغيير في مدى العمل المطلوب تنفيذه وطبيعته أو عدم تنفيذه أو اتخاذ أي إجراءات أو تدابير من طرفكم أو أي طرف ثالث يمكن أن تعفينا أو تحررنا من تنفيذ التزاماتنا ومسؤولياتنا المذكورة في هذا الضمان.
(ه) يظل هذا الضمان صالحًا حتى نهاية [اليوم] [الشهر] [العام] (المُشار إليه فيما يلي باسم "تاريخ الانتهاء"). ويُعتبر هذا الضمان ممتدًا بشكل تلقائي بدون تعديل لمدة عام من تاريخ الانتهاء أو أي تاريخ انتهاء مستقبلي، ما لم نبلغك بواسطة السويفت أو البريد المسجل أو خدمة النقل أن هذا الضمان لن يتم تجديده لأي فترة إضافية قبل عشر (10) أيام على الأقل من هذا التاريخ.
(و) نقر ونؤكد أن قيمة هذا الضمان لا تتخطى نسبة 20% من رأس المال المدفوع لهذا البنك والاحتياطات الرأسمالية الخاصة به.
(ز) يجب تحويل أي نزاع يخص هذا الضمان فقط إلى الهيئات المختصة وفقًا للقوانين واللوائح والتعليمات المذكورة في المملكة العربية السعودية.
___________________
[البنك]
المفوض بالتوقيع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ه) –تقرير حالة خطاب الاعتماد
تقرير الحالة ربع السنوي لخطاب الاعتماد
1. الرصيد الأولي (خطاب الاعتماد) _____________ دولار أمريكي
2. التمويل الإضافي (إن وجد) _____________ دولار أمريكي
3. إجمالي تمويل خطاب الاعتماد (1+2) _____________ دولار أمريكي
4. المبالغ المستلمة بموجب خطاب الاعتماد _____________ دولار أمريكي
5. الرصيد المتوفر (3-4) _____________ دولار أمريكي
6. المبلغ المفوتر، ولكن غير المدفوع _____________ دولار أمريكي
7. الالتزامات المعلقة _____________ دولار أمريكي
8. الرصيد المتاح لخطاب الاعتماد [5 -_6+7)] _____________ دولار أمريكي
9. القيمة المقدرة المطلوبة للاثني عشر شهرًا القادمة _____________ دولار أمريكي
التعليقات:
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (و)
شهادة مطابقة
رقم شهادة المطابقة: __________________
رقم العقد: __________________
رقم أمر الشراء: __________________
رقم قائمة التعبئة: __________________
نشهد بموجب هذه الشهادة أن البنود المذكورة في قائمة التعبئة المذكورة أعلاه مُصنعة ومُعاينة وفقًا للرسومات والمواصفات المعمول بها، وتتوافق مع شروط العقد.
المشتري: وزارة الدفاع
القوات __________ الملكية السعودية
فرع __________
الرياض __________
المملكة العربية السعودية
تفاصيل المتعهد: اسم الشركة وعنوانها
الرقم المرجعي: (___________________)
رقم خطاب الاعتماد: (___________________)
تؤكد الوزارة أن المتعهد قد أوفى بالتزاماته التعاقدية بموجب هذا العقد وفقًا للشروط والأحكام والمواصفات الفنية المحددة بواسطة الوزارة بتاريخ ___/ ___/ 1433ه الموافق ___/ ___/ 2012م. وبناءً على ذلك، تكون هذه الشهادة شهادة تسوية للعقد والإيصال النهائي لجميع محتوياته.
وبموجب هذه الشهادة، يحق للمتعهد تحصيل المبالغ المتبقية المستحقة من إجمالي قيمة هذا العقد وفقًا للبند رقم 4.3.1.5 من الشروط الخاصة.
إثباتًا لما تقدم، تم التوقيع بواسطة:
معالي قائد القوات الجوية معالي رئيس الأركان
صدقها
سلمان بن عبد العزيز
وزير الدفاع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ح)
جدول التسليم
الرقم الوصف الكمية سعر الوحدة السعر الإجمالي تاريخ التسليم بعد تاريخ سريان العقد بالأشهر
الطائرة كينج أير (350 ER) الأولى 1 8,948,274 دولار أمريكي ديسمبر 2013
الطائرة كينج أير (350 ER) الثانية 1 8,948,274 دولار أمريكي يناير 2014
الطائرة كينج أير (350 ER) الثالثة 1 8,948,274 دولار أمريكي فبراير 2014
الطائرة كينج أير (350 ER) الرابعة 1 8,948,274 دولار أمريكي مارس 2014
توفير قطع الغيار مجموعة 2,826,026 دولار أمريكي 24 شهر بعد توقيع العقد
خلال التدريب وبعده غير مسعر
الدعم التشغيلي والصيانة مجموعة 13,047,544 دولار أمريكي 24 شهر بعد توقيع العقد وخلال فترة 36 شهر
الدعم التشغيلي والصيانة المقدم من قبل طرف آخر غير مسعر
إجمالي قيمة الشراء
إجمالي قيمة العقد 51,666,666 دولار أمريكي
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ط)
إجراءات المعاينة والقبول للمواد
يقوم المتعهد بأداء الاختبار والمعاينة العادية التي يتم إنجازها غالبًا على المواد بموجب هذا العقد. ويتم توقيع شهادات المعاينة والقبول التي تظهر نتائج اختبار المواد والأرقام المسلسلة بواسطة ممثلي المورد والحكومة إن أمكن خلال الاختبار. ويصدر المتعهد الشهادات التالية مع كل تسليم:
• شهادة ضمان
"نضمن بموجب هذه الشهادة أن المواد المذكورة فيها تطابق بالكامل العقد وأنها متوفرة بالكامل ومستوفاة للمواصفات المطلوبة في شروط التصنيع والمواد الخام. وفي حالة التأكيد على وجود أي عيوب فيها عند الاستلام أو في حالة عدم امتثالها للمواصفات المذكورة في العقد، نتعهد باستبدالها مجانًا وبدون تكلفة إضافية على الحكومة."
• شهادة مطابقة
- انظر الملحق (و) –نموذج شهادة المطابقة
• شهادة فحص
"نشهد بموجب هذه الشهادة أن جميع المواد الموردة والمفصلة فيه تطابق بالكامل مواصفات العقد، وأن هذه المواد جديدة وغير مستخدمة ومُصنعة حديثًا. كما نشهد أنه قد تم فحص المواد واختبارها من قبلنا قبل شحنها، وقد تم التوصل إلى أنها قابلة للاستخدام ومطابقة لجميع المواصفات والشروط الفنية المحددة في أمر الشراء."
• شهادة منشأ
"نشهد بموجب هذه الوثيقة أن جميع المواد الموردة والمفصلة فيه هي من أصل _______________"
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ي)
شهادة القبول والتسليم لشحنة/ شحنات
المشتري: وزارة الدفاع
القوات ___________ الملكية السعودية
فرع ___________
الرياض ___________
المملكة العربية السعودية
المستخدم: وزارة الدفاع
القوات ___________ الملكية السعودية
فرع ___________
الرياض ___________
المملكة العربية السعودية
الرقم: (______________________)
رقم خطاب الاعتماد: (______________________)
نشهد بموجب هذه الوثيقة أن صناديق الشحن الجزئي/ الشحن رقم (______________________) الموردة بموجب بوليصة الشحن الجوي رقم (______________________) وفاتورة المتعهد رقم (______________________) بقيمة (______________________) دولار أمريكي، قد تم استلامها وقبولها عند التأكد من أن جميع الصناديق تتوافق مع المواصفات والتواريخ المذكورة في العقد.
تاريخ وصول الشحنة: ___________
الممثل: ___________ القائد: ___________
التاريخ: ___________
ممثل المورد: ___________
التوقيع: ___________
التاريخ: ___________
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الجزء الرابع –بيان طريقة العمل
طائرة الدفع التوربيني للاستخبارات والاستطلاع والمراقبة للقوات ******
قائمة المحتويات
1. مقدمة 15
2. تعريف الطائرة 15
3. التدريب 42
4. خدمات التدريب الأخرى 47
5. الوثائق والتسليمات 48
6. خدمة النسخ المعدلة 50
7. الضمان 51
8. الصيانة/ الدعم التشغيلي 52
9. توفير قطع الغيار 52
10. العمليات والصيانة والجاهزية التشغيلية 52
11. تسليم طائرات كينج أير 350 إي أر والموافقة عليها 53
1. مقدمة
1.1. تشترط ****** شراء (4) طائرات مُصنعة حديثًا وغير مستعملة مسبقًا من طراز كينج أير 350 إي أر (إفايهايه موديل بي 300) بتجهيزاتها ذات الصلة المفصلة في الفقرة الثانية في تعريف الطائرة، ومجهزة بمحركات دفع توربيني فئة PT6A-60A مصنعة من قبل شركة برات أند ويتني كندا المحدودة، وكذلك قطع الغيار، وخدمات الدعم الفني، وخدمات التدريب والصيانة. ولدعم هذه الطائرات، يحدد بيان طريقة العمل هذا أيضًا الخدمات الإضافية التي يزودها المتعهد في الجزء الخامس من هذا العقد. ويتحمل المتعهد مسؤولية تزويد الطائرات بالبنود والخدمات المذكورة في هذا العقد.
2. تعريف الطائرة
2.1. الوصف العام –أربع (4) طائرات تنفيذية من طراز كينج أير 350 إي أر (إف ايه موديل بي 300) بمحرك دفع توربيني مزدوج تنتفع من كامل الهيكل المعدني. وتضم كل طائرة المؤن من أجل تسعة ركاب وأمتعتهم بالإضافة إلى طاقم مكون من فردين. وكل طائرة مجازة للتشغيل بواسطة طيار واحد مع تصميم داخلي مصقول يمكن تعديله بسهولة بعد التسليم. وتشتمل كل طائرة على منطقة غسيل خاصة تشتمل على مرحاض مطوق مجاز بالكامل للشَغل أثناء الإقلاع وأثناء الرحلة وأثناء الهبوط. وينبغي أن تكون جميع الطائرات مجازة وفقًا للوائح الطيران الفيدرالية –الجزء 23 –فئات الركاب.
2.2. الأبعاد
الأبعاد
الارتفاع الكلي 14 قدمًا و4 بوصات (4.37م)
الطول الكلي 46 قدمًا و8 بوصات (14.22م)
الجناح
المروحة (كلية) 57 قدمًا و11 بوصة (17.65م)
المساحة 310 قدم مربعة (28.8 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 250/0)، 0.0 درجة امتداد، 0.0 درجة
الزاوية الثنائية 6.0 درجة 6.0 درجة
النسبة الباعية 10.8
متوسط الوتر الديناميكي الهوائي 5 أقدام و10 بوصات (1.78م)
الذيل الأفقي الذيل الأفقي
المروحة (كلية) 18 قدمًا و5 بوصات (5.61م)
المساحة 68 قدمًا مربعًا (6.32 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 25%) 17 درجة
الزاوية الثنائية 0 درجة
النسبة الباعية للذيل الرأسي
المساحة 52.3 قدمًا مربعًا (4.86 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 25%) درجة 37.1 درجة
النسبة الباعية 1.1
المقصورة
إجمالي الطول المضغوط 24 قدمًا و10 بوصات (7.57م)
الطول (باستثناء مقصورة الطيار) 19 قدمًا و6 بوصات (5.49م)
الارتفاع (الحد الأقصى) 4 أقدام و9 بوصات (1.45م)
العرض (الحد الأقصى) 4 أقدام و6 بوصات (1.37م)
العرض –على الأرض 4 أقدام و1 بوصة (1.24م)
باب الدخول
الارتفاع (الحد الأدنى) 4 أقدام و3.5 بوصات (1.31م)
العرض (الحد الأدنى) 2 قدم و3 بوصات (0.68م)
2.2.1. أوزان التصميم وسعاته
2.2.1.1. الحد الأقصى لوزن المهبط 16,600 رطل (7,530 كجم)
2.2.1.2. الحد الأقصى لوزن الإقلاع 16,500 رطل (7,484 كجم)
2.2.1.3. الحد الأقصى مع عدم وجود وقود 13,000 رطل (5,897 كجم)
2.2.1.4. الحد الأقصى لوزن الهبوط (فئات الركاب) 15,675 رطل (7,110 كجم)
2.2.1.5. سعة الوقود (المستخدم) عند 6.7 رطل لكل جالون أمريكي 5,192 رطل (2,355 كجم)
2.2.1.6. الوزن الأساسي للطائرة فارغة* 9.356 رطل (4,244 كجم)
يشتمل الوزن الأساسي للطائرة فارغة على الوقود غير المستخدم والزيت والتصميم الداخلي المصقول والإلكترونيات وأقفال الوقود لكُنة الجناح.
2.3. الأداء
2.3.1.1. تقوم جميع بيانات الأداء على الطائرة القياسية والأحوال الجوية القياسية الدولية. وتقوم أطوال الإقلاع والهبوط على المستوى، السطح الصلب والممرات الجافة مع عدم وجود رياح.
2.3.1.2. المدى (±3%)، السرعة العادية للتطواف 2,288 نانومتر (4,237 كم)
ملاحظة: 1 طيار +4 ركاب. ويسمح المدى بالتدرج والإقلاع والتسلق والتطواف والهبوط، وتستبقي قواعد الطيران الآلي الخاصة بالرابطة الوطنية لطيران رجال الأعمالوضع قدره 100 نانومتر بديلة).
2.3.1.3. سرعة التوقف (تجهيز الهبوط)
(عند 15,000 رطل/ 6,804 كجم) 81 ألف طن (150 كم/ ساعة) الحالات الجوية القياسية الدولية
2.3.1.4. الحد الأقصى لارتفاع التشغيل 35,000 قدم (10,668م)
2.3.1.5. طول ميدان الإقلاع
(ملاحظة: لوائح الطيران الفيدرالية 23 (فئات الركاب)، ومستوى البحر، والحالات الجوية القياسية الدولية، وأسلوب القلابات، وتكييف الهواء ونزيف الهواء، 16,500 رطل -7,530 كجم) 4,473 قدم (1,363م)
2.3.1.6. مسافة الهبوط
(ملاحظة: لوائح الطيران الفيدرالية –فئات الركاب، ومستوى البحر، والحالات الجوية القياسية الدولية، 15,675 رطل -7,110 كجم) 2,980 قدم (908م)
2.3.1.7. السرعة العادية للتطواف (±3%)
(ملاحظة: الحالات الجوية القياسية الدولية –ارتفاع 24,000 قدم (7,315م)، 13,500 رطل (6,123 كجم)، والحد الأقصى لطاقة التطواف 1,500 دوران في الدقيقة) 302 ألف طن (559 كم/ ساعة)
2.3.1.8. الضوضاء في الإقلاع
(ملاحظة: بيانات التضخيم وفقًا للملحق (ز) من 14 قانون اللوائح الفيدرالية 36 أو الملحق 16 من منظمة الطيران المدني الدولي –الفصل 10) 81,45 ديسبل
2.4. معايير التصميم الهيكلي
2.4.1.1. جناح الطائرة كينج أير 350 إي أر وجسمها من الطراز التقليدي بجسم شبه أحادي، ويضم بأجنحة مدعومة ومجموعة ذيل على شكل T. ومعظم الهياكل مصنعة من مزيج الألومنيوم عالي القوة. وتُستخدم المواد الصلبة والمواد الأخرى وفق الحاجة. ويقوم التصميم على مفاهيم تفاوت تحمل الأضرار. وهيكل الطائرة مجازً لتفاوت تحمل الأضرار (عمر غير محدود) بما يضمن استمرار السلامة الهيكلية عبر برنامج الفحص وإجراءات الصيانة المناسبة. وينقسم هيكل الطائرة إلى ثلاثة مكونات رئيسة: الهيكل والجناح ومجموعة الذيل.
2.4.1.2. حدود الحمل لمناورة التصميم هي تقريبًا -1.21 إلى +3.01جم.
2.4.1.3. في الحد الأقصى لارتفاع التشغيل المقدر بـ 35,000 قدم (10,668م)، يكون فرق ضغط المقصورة الضئيل 6.5 ± 0.1 رطل لكل بوصة مربعة بما يوفر ارتفاع للمقصورة قدره 10,380 قدم (3,164م).
2.4.1.4. حدود السرعات
2.4.1.4.1. أقصى سرعة للتشغيل
(عند مستوى البحر 24,000 قدم (7,315م) 245 عقدة للسرعة الجوية المبينة (454 كم/ ساعة)
2.4.1.4.2. أقصى سرعة للتشغيل
(24,000 قدم (7,315م) إلى 35,000 قدم (10,668م) 245 إلى 192 عقدة للسرعة الجوية المبينة (454 إلى 356 كم/ ساعة)
2.4.1.4.3. أقصى تشغيل ماخ 0.58م
2.4.1.4.4. سرعات تمديد القلابات
2.4.1.4.4.1. سرعة اللوحات الممتدة (الاقتراب) 202 عقدة للسرعة الجوية المبينة (374 كم/ ساعة)
2.4.1.4.4.2. سرعة اللوحات الممتدة (الهبوط الكامل) 158 عقدة للسرعة الجوية المبينة (293 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5. سرعة التشغيل والتمديد لتروس الهبوط
2.4.1.4.5.1. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (التمديد) 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة (337 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5.2. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (الانسحاب) 158 عقدة للسرعة الجوية المبينة (293 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5.3. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (تشغيل الطوارئ) 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة (337 كم/ ساعة)
2.4.1.4.6. مدى مركز الجاذبية
2.4.1.4.6.1. الحد الأمامي إلى 11,800 رطل (5,352 كجم) 7.8% ماك
2.4.1.4.6.2. الحد الأمامي إلى 16,500 رطل (7,484 كجم) 24.8% ماك
2.4.1.4.6.3. الحد الخلفي 31.7% ماك
2.5. جسم الطائرة
2.5.1.1.1. جسم الطائرة مصنع من مزيج الألومنيوم عالي القوة مع استخدام مناسب للمواد الصلبة والمواد الأخرى. ويقوم التصميم الهيكلي على مبادئ التفاوت لتحمل الأضرار (القصور –السلامة) باستخدام مسارات حمل متعددة وألواح مزدوجة ملصوقة وألواح بأحجام صغيرة على الهيكل الأساسي.
2.5.1.1.2. الجسم متعدد الهياكل مشكل لتوفير مقصورة مثالية وراحلة للركاب. وأقصى عرض للمقصورة من الداخل هو 4 أقدام و6 بوصات (1.37م) وأقصى ارتفاع للمقصورة 4 أقدام و9 بوصات (1.45م).
2.5.1.1.3. ينقسم الجسم إلى ثلاثة أقسام: قسم المقدمة غير المضغوطة، وقسم سطح الطائرة المضغوط والمقصورة، وقسم الذيل غير المضغوط.
2.5.1.2. قسم المقدمة
2.5.1.2.1. يوفر قسم المقدمة المساحة المتوفرة للمعدات الإلكترونية، وهوائي رادار الطقس، وأضواء الهبوط، وترس هبوط المقدمة. وتقع المعدات الإلكترونية في القسم العلوي من بائكة المقدمة ويمكن الدخول إليها عبر أبواب الدخول إلى المقدمة في الجانبين الأيمن والأيسر القابلين للقفل. ويقع ترس هبوط المقدمة وأضواء الهبوط في بئر العجلة في القسم السفلي من المقدمة.
2.5.1.3. قسم المقصورة المضغوطة
2.5.1.3.1. تحتوي مقصورة الطيار ومقصورة الركاب على قسم مضغوط من جسم الطائرة. ويمتد الوعاء المضغوط من الحاجز المضغوط الأمامي إلى الحاجز المضغوط الخلفي، ويضم حد أقصى لفرق الضغط التشغيلي قدره 6.6 رطل لكل بوصة. ويقع باب دخول المقصورة بالجانب الأيسر الخلفي من الجسم، في حين أن الجانبين الأماميين الأيسر والأيمن في الجسم يضمان أبواب خروج الطوارئ.
2.5.2. قسم الذيل
2.5.2.1. يحتوي قسم الذيل على مساحة من أجل زجاجة الأكسجين ومسجل الصوت في المقصورة.
2.5.3. نوافذ مقصورة الطيران
2.5.3.1. يكون الزجاج الأمامي من الزجاج والأكريليكالمشطر، ومضادة للجليد باستخدام عناصر الحرارة الإلكترونية بين ألواح الزجاج. ويتم تحقيق إزالة المطر على الأرض وأثناء الطيران على سرعة منخفضة باستخدام ماسحات الزجاج الأمامي الإلكترونية الميكانيكية.
2.5.4. الجناح
2.5.4.1.1.1. الجناح من الهيكل شبه الأحادي ضامًا عوارض من طرف الجناح إلى طرف الجناح. وتكون العوارض الأمامية والخلفية مشابهة في الإنشاء الذي يضم سحب الغطاء وأعضاء التقوية والسير المعدنية. ويحتوي القسم الداخلي على مجموعة من رافعات القنوات مركبة بشكل متتابع، ومصنوعة من 7075 لوح ألومنيوم، ومطروقة من أجل تركيبات العوارض الأمامية والخلفية. وتُرفق الأجنحة بالقسم المركزي للجناح في هذه التركيبات باستخدام ثمانية مزالج. ويتم تركيب تركيبات إرفاق ترس الهبوط الرئيس بالعارضة الخلفية. ويتم تركيب القلابات والجنيحات على الجناح.
2.5.4.2. تُرفق القلابات الأربعة بحواف الجر في الجناح. وتُرفق القلابات بمجموعات القضبان في الحواف الداخلية من الجناح. وتحتوي القلابات على عوارض أمامية وخلفية وعروق معدنية وألواح جانبية وغطاء ايرودينامي.
2.5.4.3. تعمل قلابات الجناح كهربائيًا باستخدام محرك كهربائي للقلاب. ويتم تزويد آلية السلامة لفصل الطاقة على المحرك الكهربائي للقلاب في حالة حدوث حالة غير مماثلة. ويعمل نظام القلاب بواسطة رافعة التحكم في القلاب الموجودة على القاعدة المركزية. وتضم رافعة التحكم في القلاب ثلاثة مواضع: علوي، واقتراب، وسفلي.
2.5.4.4. يتم تركيب الجنيحات بالإنشاء المركب في طرف الجناح لتحسين الأداء. وتتواجد إضاءة التمييز في الحافة الأمامية من كل طرف جناح.
2.5.5. مجموعة الذيل
2.5.5.1. تحتوي مجموعة الذيل على مثبت رأسي ومثبت أفقي عرضي ثابت في تصميم على شكل T، وتُرفق الرافعات إلى حافة الجر من المثبت الرأسي ويتم تشغيلها عبر مجموعة كابل/ بكرة موصلة بعمود التحكم. وتُرفق دفة التوجيه بحافة الجر من المثبت الرأسي. ويُرفق سطح تعديل الموازنة لدفة التوجيه بحافة الجر السفلية بدفة التوجيه.
2.5.5.2. يتم فك الجليد من الحواف الأمامية للمثبت الأفقي باستخدام معدات أجهزة الجليد المملوءة بالهواء المضغوط.
2.5.5.3. يقع المصباح المومض الأبيض بالجانب العلوي من المثبت الرأسي، ويقع مصباح وضع الذيل الأبيض على الجانب العلوي في قسم المؤخرة بالمثبت الرأسي. ويقع مصباح تدفق الذيل على السطح السفلي في المثبت الأفقي لإضاءة المثبت الرأسي.
2.5.6. ترس الهبوط
2.5.6.1. تُعتبر الطائرات كينج أير 350 إي أر مجهزة بترس هبوط ثلاثي العجلات قابل للسحب. ويستخدم ترس الهبوط الرئيس الهواء العادي على دعامات الزيت، ويُسحب إلى الامام في كل كنة محرك. يستخدم ترس المقدمة الهواء العادي على قفل صدمات الزيت ويُسحب إلى الخلف تجاه قسم المقدمة. ويتم التحكم في ترس الهبوط كهربائيًا، ويتم تحريكه هيدروليكيًا، ويتم غلقه بواسطة الأبواب المحركة ميكانيكيًا.
2.5.6.2. يمكن أن يمتد ترس الهبوط عند سرعات تصل إلى 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة أو يُسحب في سرعات تصل إلى 164 عقدة للسرعة الجوية المبينة. ويوفر موضع ترس الهبوط ونظام الإنذار المؤشرات البصرية والسمعية لموضع ترس الهبوط. ويقع ضوء المؤشرات الخضراء الثلاثة بجوار مقبض التحكم في ترس الهبوط، ويقع ضوء الإنذار الأحمر في مفتاح مقبض الترس.
2.5.6.3. يتم إنجاز تمديد بديل لترس الهبوط بواسطة نظام يدوي يتطلب أن يتم خفض ترس الهبوط باستخدام مقبض تمديد بديل.
2.5.6.4. ولتسهيل تجهيز الوزن الكلي الزائد، تم تجهيز الطائرة من طراز كينج أير 350 إي أر بتروس هبوط للتشغيل الثقيل يوفر سعة حمل دعامة متزايدة، كما يتم استبدال الإطارات والعجلات الخاصة بترس الهبوط الرئيس للطائرة كينج أير 350 بعجلات من مزيج الألومنيوم المصبوب 6.50×10 بعدد 10 إطارات أنبوبية 22×6.75، 10 إطارات رقائقية.
2.5.7. توجيه المقدمة
2.5.7.1. يتم تحريك توجيه المقدمة بواسطة مدوس الدفة لتوفير تحكم التوجيهي على الأرض. وتكون أقصى حد لزاوية التوجيه المتوفرة 49 درجة إلى اليسار أو اليمين. وتكون زاوية الربط الميكانيكي لربط مدوس الدفة 14 درجة إلى اليسار و12 درجة إلى اليمين مع التوجيه الإضافي المطلوب عبر استخدام كبح تفاضلي وضغط غير متماثل.
2.6. المكابح
2.6.1. الطائرة مجهزة بأربع مجموعات تعمل هيدروليكيًا بمكابح معدنية مبطنة ومتعددة الأقراص، واحد في كل عجلة ترس رئيس. وتُستخدم المكابح بواسطة ضغط طرفي على مدوس الدفة الخاص بالطيار أو الطيار المساعد. ويتم تركيب المكابح المضادة للتجميد قياسية.
ملاحظة: يُسمح بتغطية نظام إذابة الجليد على العجلات أثناء التواجد في المملكة. ومن غير الشائع لصمامات الإغلاق الهوائي لنظام إذابة الجليد في المكابح أن يحدث تسريب مفرط أو أن تعلق أثناء أداء الطيارين لإجراءات تشغيل المحرك أو الطيران. فهذا يزيد من درجة حرارة التوربين الداخلي للمحرك وتدفق الوقود فيه.
2.7. محطات الطاقة
2.7.1. يتم تشغيل الطائرات كينج أير 350 إي أر بواسطة كنة محرك مركبة على المحركات ذات الدفع التوربينيPT6A-60A المُصنعة بواسطة شركة برات أند ويتني كندا ليمتد. وهذا المحرك هو توربين حر (لا يتم توصيل مولد البنزين وأجزاء توربين الطاقة بشكل مادي)، ولذا تكون شروط الطاقة خلال تشغيل المحرك منخفضة نسبيًا. ويولد كل محرك PT6A-60A سعة 1,050 حصان في اليوم العادي بمستوى البحر.
2.7.2. يمكن أن يبدأ المحرك العمل باستخدام بطارية الطائرة أو الطاقة الخارجية.
2.7.3. يعمل نظام مراقبة الحريق في الدائرة الكهربائية المغلقة على مراقبة حجرة المحرك لاكتشاف الحريق والإنذار به في حالة حدوثه. ويتم تزويد نظام إطفاء حريق للمحرك.
2.7.4. أجهزة تحكم نظام الدفع
2.7.4.1. يعمل نظام الدفع بواسطة ثلاثة مجموعة من أجهزة التحكم: رافعات الطاقة، ورافعات المروحة، ورافعات الحالة. تعمل رافعات الطاقة على التحكم في طاقة المحرك، وتعمل رافعات الحالة على التحكم في تدفق الوقود في مخرج ضبط الوقود، ويختار فصل الوقود والتوقف المنخفض ووظائف التوقف المرتفع. وتعمل رافعات المروحة بشكل تقليدي وتتحكم في مراوح السرعة المستمرة عبر ضابط رئيس.
2.7.5. رافعات الطاقة
2.7.5.1. توفر رافعات الطاقة التحكم في طاقة المحرك من التوقف عبر انقطاع الطاقة بواسطة تشغيل ضابط مولد البنزين في وحدة ضبط الوقود، وينتج من سرعة لفات ضابط مولد البنزين زيادة طاقة المحرك.
2.7.6. رافعات المروحة
2.7.6.1. تضبط كل رافعة مروحة ضابط المروحة بما ينتج عنه زيادة سرعة المروحة أو خفضها. وفيما يخص دوران نصل المروحة، تطلق كل رافعة مروحة زيت ضغط عالِ من المرحة بما يسمح للموازنة ونابض دوران نصل المروحة من تغيير درجة الميل. وتعمل الحابسة في الجانب الخلفي من مدى تحرك الرافعة على منع الحركة غير المقصودة في مدى دوران نصل المروحة. وفي الرحلة، يكون مدى التشغيل من 1,450 إلى 1,700 لفة في الدقيقة.
2.7.7. رافعات الحالة
2.7.7.1. تضم رافعات الحالة ثلاثة مواضع: قطع الوقود، والتوقف المنخفض، والتوقف المرتفع، وتتحكم كل رافعة في وظيفة فصل الوقود من وحدة ضبط الوقود، ويحد سرعة التوقف
2.8. المراوح
2.8.1. كل محرك مجهز بأربعة شفرات قطر كل منها 105 بوصة من نوع هارتزل تقليدية ونصل حركة كامل ومروحة بدوران كامل للنصل وسرعة ثابتة وتوازن وعكسية بانحراف متغير، ومركبة على عمود المخرج الخاص بعلبة تروس التخفيض. يتم التحكم في انحراف المروحة وسرعتها بواسطة ضغط زيت المحرك عبر ضوابط إجراء فردي مدفوعة بالمحرك. يعمل الموازن بالطارد المركزي الذي يساعده نابض دوران النصل، بتحريك الشفرات نحو سرعة منخفضة (انحراف مرتفع) وفي وضع دوران النصل. ويعمل الضابط الذي يعزز ضغط زيت المحرك على تحريك المروحة إلى سرعة مرتفعة (انحراف منخفض) في وضع التوقف الهيدروليكي والحركة الخلفية. لا تمتلك المراوح توقفات على سرعة منخفضة (انحراف مرتفع) بما يسمح للشفرات بالدوران بعد إيقاف المحرك.
2.8.2. وتُزود الأنابيب المربوطة بالمروحة للاستخدام على الطائرة المربوطة لمنع الدوران كطاحونة الهواء في ضغط زيت صفر.
2.8.3. دوران النصل الأوتوماتيكي للمروحة
2.8.3.1. مع تفعيل نظام دوران النصل الأوتوماتيكي للمروحة، في الحالات غير المرجحة لقصور المحرك خلال الإقلاع، تقوم المروحة الموجودة على هذا المحرك بالدوران أوتوماتيكيًا.
2.8.4. المطوار المتزامن
2.8.4.1. تمتلك الطائرات كينج أير 350 إي أر نظام مطوار متزامن، لا يعمل فقط على مزامنة سرعة المروحة، ولكن أيضًا على توجيه مواضع الشفرات بحيث لا تمر شفرات المروحة اليمنى واليسرى بالجسم في الوقت نفسه. وهذا يمنع ضوضاء الطرق في بعض الأوقات في الطائرات ذات المحرك المزدوج بدون طور. ويُعرض هذا النظام على شاشة متعددة الوظائف.
2.9. النظم
2.9.1. أجهزة تحكم الطائرة
2.9.1.1. يتم تزويد أجهزة تحكم بالرحلة ثنائية، ويكون نظام التحكم الرئيس بالتصميم التقليدي ويعمل يدويًا عبر كابلات تحكم، وقضبان دفع وسحب وروابط ميكانيكية تزود الانحراف والميل والانعراج. ويتم التحكم في ارتفاع الانحراف للطائرة بواسطة الرافعات. ويتم التحكم في الميل بواسطة الجنيح. ويتم التحكم في الانعراج باستخدام دفة القيادة.
2.9.1.2. يوفر نظام التحكم الثانوي موازن كهربائي ونظام انحراف وموازن ميل من أسطح موازنة الميل التي تعمل يدويًا، وكذلك موازن انعراج من أسطح موازنة دفة القيادة التي تعمل يدويًا.
2.9.1.3. تشتمل دفة القيادة على تروس معدلة للسان دفة القيادة لتوفير لسان مضاد للمؤازرة في دفة القيادة مع مدى حركة إضافي لدعم الثبات التوجيهي المحسن للطائرة.
2.9.1.4. يتم تثبيت نظام تعزيز دفة القيادة وتجهيزه بمفتاح قائم تحكم مركب إلى وضع تعزيز دفة القيادة. يحس النظام بعزم دوران المحرك من المحركين. وعند تخطي التفاوت في عزم الدوران إلى مستوى معد مسبقًا، يتم تفعيل المؤازر الكهربائي ويسبب انحراف الدفة بما يساعد الطيار.
2.9.1.5. هناك أربعة قلابات مركبة على الأجنحة، حيث تتحرك القلابات في مسارات مدفوعة بآلية الدفع على الدعامة الخلفية للجناح. ويتم تحريك قلابات الجناح كهربائيًا وتوصيلها بشكل داخلي بواسطة نظام السلامة لضمان التشغيل المتماثل. ويتم التحكم في نظام القلاب بواسطة رافعة التحكم في القلاب الموجود في القاعدة المركزية.
2.9.2. نظام الوقود
2.9.2.1. تتميز الطائرات كينج أير 350 بنظام وقود تقليدي بسعة كبيرة يحتاج إلى حد أدنى من الإدارة، وتكون إدارة الوقود أوتوماتيكية في التشغيل العادي.
2.9.2.2. يوفر نظام الوقود إمداد وقود مستقل لكل محرك ومصمم لعمل على ارتفاع 35,000 قدم في درجة حرارة تتراوح بين -40 درجة مئوية إلى +50 درجة مئوية في نفاث الوقود A أو نفاث الوقود A-I أو نفاث الوقود B أو JP-4 أو JP-5 أو JP-8. وتتوافق جميع المكونات في نظام الوقود مع جميع أنواع الوقود المعتمدة للمحرك PT6A-60A.
2.9.2.3. يحتوي نظام الوقود على نظامين مختلفين متصلين بواسطة خط تغذية متقاطع بتحكم صمامي، وينقسم نظام الوقود لكل محرك على نحو إضافي إلى نظام وقود رئيس وملحق ومدى ممتد. ويحتوي النظام الرئيسي لخزان الوقود الداخلي على خزانين بحافة أمامية لجناح الطائرة، وخزانين بنفاخة قسم الصندوق، وخزان تكميلي (خلية سائلة)، وترتبط جميعها داخليًا بالتدفق في خزان كنة الوقود بواسطة الجاذبية. وتُملأ الخزانات من المالئ القريب من طرف الجناح.
2.9.2.4. يحتوي نظام الوقود الملحق على خزان قسم مركزي مع فتحة ملء خاصة به ونظام تحويل وقود أوتوماتيكي لتحويل الوقود إلى نظام الوقود الرئيس.
2.9.2.5. توفر خزانات الوقود بالمدى الممتدة 118 جالونٍ إضافي من الوقود من كل منهم (بإجمالي 236 جالون قابل للاستخدام) زيادةً على ما هو قياسي للطائرات كينج أير 350، وتمتلك فتحات ملء خاصة بها. ويتم تغذية الوقود من هذه الخزانات في خزانات كنة وقود داخلية. وعند ملء خزانات المدى الممتد، يتم استهلاك الوقود الموجود في هذه الخزانات أولًا.
2.9.2.6. تُركب مضحة الوقود المدفوعة بالمحرك (الضغط المرتفع) على صندوق ملحق متصلًا بوحدة ضبط الوقود. ومضخة التعزيز الرئيسة (الضغط المنخفض) تكون مدفوعة أيضًا بالمحرك.
2.9.3. النظام الهيدروليكي
2.9.3.1. يتم تشغيل النظام الهيدروليكي بواسطة مضخة مدفوعة بمحرك كهربائي، ويقوم بتزويد ضغط هيدروليكي لسحب ترس الهبوط وتمديده.
2.9.4. النظام الكهربائي
2.9.4.1. يتم تزويد الطائرة بالطاقة الكهربائية بواسطة مولدي بدء تشغيل مدفوعين بالمحرك 280 فولت تيار مباشر 300 أمبير، وتقوم البطارية الحمضية الرصاصية A 24 فولت، 42 أمبير في الساعة بتزويد الطاقة الكهربائية لتشغيل المحرك ولحالات الطوارئ. يتم تزويد حوض الطاقة الكهربائية A 28 فولت تيار مباشر الموجود أسفل الجناح الأيمن خارج الكنة من أجل توصيل وحدة الطاقة الخارجية.
2.9.4.2. يتم توزيع الطاقة الناتجة من هذه المصادر عبر نظام توزيع الطاقة الكهربائية بالتيار المباشر، بما يزود الطاقة لأحمال الطاقة الكهربائية المنفردة عبر نظام متعدد الأنابيب. ويتصل كل مصدر طاقة بنظام التوصيل كهربائيًا عبر محامل وموصلات خطية.
2.9.4.3. يقوم المحول A 500 فولت –أمبير في أصل قاعدة الجناح الأيمن بتوفير طاقة تيار متغير 15 فولت 60 هيرتز لأربعة مخارج كهربائية تقع في المقصورة (ملحوظة: يمكن استخدام مخرجين فقط في الوقت نفسه.
2.9.5. تكييف الضغط والنظام البيئي
2.9.5.1. يستخدم تكييف الضغط والنظام البيئي هواء النزف لتكييف ضغط المقصورة وحرارتها، وإزالة الضباب عن نوافذ المقصورة. وخلال العمليات العادية، تكون معظم العمليات أوتوماتيكية. وتكون حالات الضبط اليدوي مطلوبة فقط للراحة الفردية، مثل ارتفاع المقصورة ومعدل ارتفاعها ودرجة حرارتها.
2.9.5.2. يتم تكييف ضغط المقصورة بواسطة تدفق الهواء من قمرة القيادة ومخارج هواء المقصورة. ويستخدم النظام جهاز ضبط متساوي الضغط متغير لدفع صمام التدفق عبر محمل هوائي. ويُفتح كل من صمامي التدفق الخارجي والسلامة بشكل أوتوماتيكي إلى أقصى حد من الضغط المتفاوت لحماية المقصورة من زيادة الضغط.
2.9.5.3. تتكون خطوط توزيع الهواء في المقصورة من أنابيب الهواء البارد وأنابيب الهواء الساخن. ويتم تسليم الهواء المُعاد تدويره و/أو المكيف إلى قمرة القيادة والمقصورة أعلى منافذ مقلة العين ودرع الوهج في قمرة القيادة. وفي حالة الحاجة إلى طاقة تبريد إضافية، يتم تحويل مسار بعض الهواء المكيف إلى التدفق خارج المنافذ السفلية بالمقصورة بواسطة جهاز ضبط درجة الحرارة. ويتم توصيل الهواء الساخن عبر المنافذ الأرضية بالمقصورة على الجانبين وإلى درع التوهج. ويكون نظام ضبط درجة الحرارة في صورة وحدة تحكم رقمية تنظم درجة حرارة الهواء الذي يتم توصيله إلى المقصورة وقمرة القيادة أوتوماتيكيًا. ويمكن ضبط درجة حرارة المقصورة وقمرة القيادة بشكل منفصل، ويمكن أن يحافظ النظام على تدفئة أو تبريد المقصورة وقمرة القيادة في درجة حرارة ثابتة خلال الارتفاع والهبوط. ويوجد أجهزة ضبط لدرجة الحرارة في المقصورة وقمرة القيادة بشكل منفصل موجودة في قمرة القيادة، حيث توفر القدرة على تنظيم درجات الحرارة في كلا المنطقتين.
2.9.6. نظام الأكسجين
2.9.6.1. يوفر نظام الأكسجين سعة 115 قدم مكعبة تدفق مناسب للأكسجين لكل من الطاقم والركاب من أجل ارتفاع ضغط المقصورة إلى 35,000 قدم. ويحتوي النظام على مجموعة منظم أسطواني للأكسجين مركب في قسم الذيل.
2.9.6.2. ويتم تزويد الطاقم بأقنعة أكسجين سريعة الارتداء، ويتم تزويد الأكسجين للركاب عبر أقنعة منسدلة تهبط تلقائيًا في حالة ارتفاع المقصورة إلى 12,500 قدم.
2.9.7. نظام الحماية من الجليد والأمطار
2.9.7.1. لا يُستخدم نزف هواء المحرك في الحماية المضادة للجليد لمأخذ المحرك. ويُستخدم عادم المحرك (يعمل دائمًا) للحواف الساخنة للمحرك. ويتم تزويد حماية الجناح والحواف المرشدة في المثبت الأفقي عبر هواء النزف دافعًا استخدام أغطية إزالة جليد هوائية. ويستخدم نظام إزالة الضباب في الزجاج الأمامي الهواء المزود من نظام تكييف الهواء. ويتم تسخين الزجاج الأمامي وصاري بيتو وتهوية الوقود والمراوح ودليل تحذير فقدان السرعة تلقائيًا.
2.9.7.2. يتم تحقيق إزالة مياه الأمطار باستخدام تطبيق ختم السطح، وكذلك يتم تزويد نظام مسح للزجاج الأمامي كهروميكانيكي لإزالة مياه الأمطار على الأرض وفي عمليات الطيران بسرعة منخفضة.
2.9.8. أغطية الوقاية
2.9.8.1. مركب شريط وقاية 3MTMعلى الحافة المرشدة للمثبت الرأسي، وكلا حافتي المثبتات الأفقية، والأجنحة، ودرعي التوهج المضيء في طرف الجناح، والسطحين الانسيابيين لالتفاف الجناح، ومأخذ تكييف الهواء. ومركب غطاء وقاية 3MTM على غطاء هوائي الرادار وكرة المثبت الرأسي –أكزو نوبل. ويتم تطبيق غلاف حماية هوائي في داخل كوة المحرك وخارجها على الحافة المرشدة في الجناح. ويتم تطبيق طبقة إضافية من ختم القفل حول الطرف الخارجي للزجاج الأمامي، سواء في منافذ المحرك وجميع النوافذ (مع استثناء نوافذ العواصف).
2.10. حجرة الرحلة والإلكترونيات
2.10.1. الطائرات من طراز كينج أير 350 إي أر مجازة للتشغيل بواسطة طيار واحد أو طيارين، وجميع أجهزة التحكم والمفاتيح موجودة لإمكانية الوصول بواسطة أي من الطيارين، وتتواجد قواطع الدوائر الكهربائية في الجدار الجانبي للطيار ومساعد الطيار، ومحددة بشكل واضح لتدل على القضيب الكهربائي ذي الصلة المزود منه الطاقة.
2.10.2. لوح التحكم في الإضاءة العلوي يقع بين الطيارين، ويضم جميع مفاتيح تشغيل الإضاءة وإطفائها في لوح آلي. ويحتوي اللوح العلوي الثاني على أجهزة قياس لمراقبة حمل المولد وأجهزة تحكم آلية في الإضاءة من أجل الطوارئ.
2.10.3. يقوم لوح إعلان التحذير (اللون الأحمر) مركزيًا في درع التوهج بتزويد إعلان النظام، ويوجد لوح إعلان التنبيه/ التوجيه/ الحالة (التنبيه باللون الأصفر، والتوجيه باللون الأخضر، والحالة باللون الأبيض) في لوح فرعي مركزي. واللمبات الوامضة للتحذير الرئيس الموجودة في درع التوهج هي جزء من النظام مثل اللمبات الوامضة للتنبيه الرئيس باللون الأصفر (تتواجد في الداخل فقط في اللمبات الوامضة للتحذير الرئيس).
2.10.4. يتم تزويد قاعدة مركزية ممتدة مع ألواح فارغة لتسهيل تركيب رؤوس التحكم ومعدات المهمة الأخرى خلال برنامج تجهيز الطائرة للمهمة.
2.10.5. الإلكترونيات
2.10.5.1. أجهزة الطيران الآلي القياسية في الطائرات من طراز كينج أير 350 إي أر هو نظام الإلكترونيات المتكامل روكويلكولينزبرولين 21. ويبسط هذا النظام التشغيل بواسطة طيار واحد ويضيف مستوى إضافي من السلامة للطائرات. ويتميز النظام بنظام معالج إلكترونيات متكامل، ونظام طيران آلي إلكتروني، ونظام مؤشر المحرك، ونظام بيانات الطيران، ونظام توجيه الارتفاع، ونظام توجيه الطيران الأوتوماتيكي، ونظام إدارة الرحلة، ونظام رادار الطقس، ومجموعة كاملة من راديو الملاحة والاتصال.
2.10.5.2. الأوضاع الاستراتيجية لمدير الرحلة والطيار الآلي تحسن إدراك الموقف وزيادة السلامة. ويمكن للطيار ضبط ارتفاع خطير، وتغييرات التوجيه والملاحة بدون النظر إلى أسفل حيث إن نظام توجيه الرحلة كولينز يوفر توجيهًا دقيقًا وموثوقًا حيث إنه يشمل نقاط ومناهج توجيه عديدة.
2.10.6. نظام معالج الإلكترونيات المتكامل
2.10.6.1. يوفر نظام معالج الإلكترونيات المتكامل تركيز بيانات وحساب ضبط الرحلة وحساب إدارة الرحلة، ويحتوي على قفص بطاقات متكامل (ICC-3000) يحتوي على وحدات خطوط قابلة للاستبدال. ويوفر نظام معالج الإلكترونيات المتكامل حماية من الحقول ذات الإشعاعات عالية الكثافة، وإضاءة لجميع الوحدات، بالإضافة إلى فصل كهربائي بين الإشارتين اليسرى واليمنى.
2.10.6.2. كما يستخدم نظام معالج الإلكترونيات المتكامل وحدتي DCU-3000 إضافيتين لرقمنة واجهة الطائرة من أجل تركيب الإلكترونيات لقيادة بلاغات الطائرة والأبواق الأذنية.
2.10.7. نظام معلومات الرحلة المتكامل
2.10.7.1. يشتمل نظام روكويلكولينز برولين 21 نظام معلومات الرحلة متكامل يوفر خصائص محسنة للخريطة من أجل العرض التقليدي (مثل الأنهاء والبحيرات والحدود المحلية والمسارات الجوية وتصورات المجال الجوي). وبالإضافة إلى ذلك، يتم تزويد بيانات الطقس مرسومة متصلة بالبيانات التفاعلية للعرض على شاشة متعددة الوظائف. وتتصل وحدة خادم الملف بكابل إيثرنت MFD، ويوفر واجهة التحكم بهذه الخصائص المحسنة باستخدام لوح تحكم مؤشرة. ويتم تزويد الخرائط الإلكترونية وتحديثات الطقس الرسومية باشتراك لمدة عام واحد لمنطقة التغطية في الوطن المختارة بواسطة العميل.
2.10.8. النظام الإلكتروني للطيران الآلي
2.10.8.1. يحتوي النظام الإلكتروني للطيران الآلي على شاشة عرض رحلة رئيسة Collins AFD-3010 على لوحتي الطيار ومساعد الطيار، وشاشة متعددة الوظائف AFD-3010 مجاورة لشاشة عرض الرحلة الرئيسة الخاصة بالطيار.
2.10.8.2. تحتوي شاشة عرض الرحلة الرئيسة على الاتجاه وتوجيه الرحلة والسرعة والسرعة الرأسية والارتفاع ومؤشر الموقف الأفقي والملاحة ومعلومات نمط توجيه الرحلة.
2.10.8.3. تعرض شاشة عرض الرحلة الرئيسة معلومات القيم المرجعية
أنجليزي إلى عربي: contract General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: القانون: العقود
لغة نص المصدر - أنجليزي pdf
ترجمة - عربي الملحق (ب)
سند ضمان حسن الأداء
إلى: [المستفيد]
خطاب الضمان رقم: [الرقم]
نضمن نحن، [اسم البنك]، بشكل غير مشروط وغير قابل للإلغاء أن ندفع لك مبلغ مليوني وخمسمائة وثلاثة وثمانين ألف وثلاثمائة وأربعة وثلاثين دولار أمريكي (2,583,334.00 دولار أمريكي) بما يمثل نسبة 5% من قيمة العقد المبرم بواسطة شركة هوكربيتشكرافت (المُشار إليها فيما يلي باسم "البائع") و****** (المُشار إليها فيما يلي باسم "المشتري") برقم [رقم العقد] بتاريخ [تاريخ العقد] (المُشار إليه فيما يلي باسم "العقد") وفقًا لما يلي:
(أ) عند استلام طلب مكتوب منك بصرف النظر عن الاعتراض من أي طرف آخر، ندفع لك فورًا المبلغ أعلاه أو المبالغ الأخرى التي يمكن أن تطلب منا دفعها، شريطة ألا تتخطى هذه المبالغ الإجمالي المذكور أعلاه، والذي قدره 2,583,334.00 دولار أمريكي عن طرق تحويله إلى حسابك البنكي لدى أي بنك في ******أو عبر أي طريقة أخرى مقبولة لديك.
(ب) أي مبالغ تم دفعها وفقًا لطلبك يجب أن تكون خالصة ومحررة من أي أعباء وبدون أي خصومات حالية أو مستقبلية مثل الضرائب على الدفع أو رسوم أو مصروفات أو إقطاعات أو خصومات أو اقتطاعات من أي نوع كان أو بواسطة أي كيان كان.
(ج) يُعدل المبلغ الذي يزيد عن 2,583,334.00 دولار أمريكي عند طلب البائع، وبدون تأكيد من المشتري أو طرف آخر بالطرق التالية:
(د) تكون الالتزامات المقدمة بموجب هذا الضمان (غير قابلة للنقض وغير مشروطة) التزامًا مباشرًا علينا. ولا نُعفى من جميع أو أي من هذه الالتزامات لأي سبب، بصرف النظر عن طبيعته أو أصله مثل التغيير في شروط العقد أو التمديد أو التغيير في مدى العمل المطلوب تنفيذه وطبيعته أو عدم تنفيذه أو اتخاذ أي إجراءات أو تدابير من طرفكم أو أي طرف ثالث يمكن أن تعفينا أو تحررنا من تنفيذ التزاماتنا ومسؤولياتنا المذكورة في هذا الضمان.
(ه) يظل هذا الضمان صالحًا حتى نهاية [اليوم] [الشهر] [العام] (المُشار إليه فيما يلي باسم "تاريخ الانتهاء"). ويُعتبر هذا الضمان ممتدًا بشكل تلقائي بدون تعديل لمدة عام من تاريخ الانتهاء أو أي تاريخ انتهاء مستقبلي، ما لم نبلغك بواسطة السويفت أو البريد المسجل أو خدمة النقل أن هذا الضمان لن يتم تجديده لأي فترة إضافية قبل عشر (10) أيام على الأقل من هذا التاريخ.
(و) نقر ونؤكد أن قيمة هذا الضمان لا تتخطى نسبة 20% من رأس المال المدفوع لهذا البنك والاحتياطات الرأسمالية الخاصة به.
(ز) يجب تحويل أي نزاع يخص هذا الضمان فقط إلى الهيئات المختصة وفقًا للقوانين واللوائح والتعليمات المذكورة في المملكة العربية السعودية.
___________________
[البنك]
المفوض بالتوقيع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ج) خطاب الاعتماد –نموذج عينة
شروط خطاب اعتماد بالدولار الأمريكي
يتم تحديده بواسطة ******
نفتح بموجب هذه الشروط خطاب اعتماد مستندي وغير قابل للنقض وغير قابل للنقل (مع موافقة الحكومة) برقم __________ بالدولار الأمريكي ليكون صالحًا حتى ____________ لصالح ____________، مع تمويل خطاب الاعتماد مبدئيًا بمبلغ واحد وخمسين مليون وستمائة وستة وستين ألف وستمائة وسبعة وستين دولار أمريكي (51,666,667.00 دولار أمريكي) مغطيًا أربع (4) طائرات جديدة من فئة كينج أير 350 إي أر مع كامل المحركات والمعدات وقطع الغيار وخدمات الدعم الفني وخدمات التدريب والصيانة المذكورة في العقد رقم ___________ (المُشار إليها فيما يلي باسم "العقد")، ويمكن دفع المبلغ المسحوب بموجب خطاب الاعتماد هذا عند تقديم سند إذني واجب الدفع عند الطلب موقعًا من قبل ____________ (المُشار إليها فيما يلي باسم ___________) المدعومة بواسطة العديد من الوثائق و/أو الإقرارات المحددة في الفئات التالية التي يُسمح مقابلها السحب بواسطة البند والفقرة المشار إليهما بشكل خاص في العقد المذكور.
1.1. السندات الإذنية واجبة الدفع عند الطلب ذات الصلة بالمعاملات المنفذة بموجب العقد رقم ________ يجب أن يتم دعمها في جميع الحالات بواسطة فاتورة تجارية من المتعهد.
1.2. تكلفة و/أو فئة رسوم واحدة أو أكثر من المعمول بها التالية يتم تحديدها بوضوح في كل فاتورة:
1.2.1. شحن التوريدات وتسليم رسومات الخدمة مع تكاليف النقل ذات الصلة التي تمثل قيمة البيع الكاملة والتامة للحكومة مقابل تكاليف الخدمة والتوريد والنقل المعمول بها المذكورة في هذا العقد.
1.2.2. مبلغ تسوية فسخ العقد، إن وجد.
1.2.3. الضرائب أو الرسوم ******المدفوعة بواسطة المتعهد، إن وجد.
1.3. يُرفق بفاتورة المتعهد أو يُشمل فيها الإقرارات والمستندات المحددة في الفئات المذكورة أدناه:
1.3.1. الشحن (التوريدات)/ تسليم رسومات (الخدمة) قطع الغيار وخدمات الدعم الفني، وخدمات الصيانة والتدريب، والخدمات الأخرى سبب الشحن/ التسليم، بالإضافة إلى الفاتورة الأصلية للمتعهد (أو في حالة الشحن الجزئي، نسخة أصلية معتمدة منها تشير إلى الشحن، يُقدم معها الأصلية).
1.3.1.1. البضائع المنقولة تجاريًا، شهادة المنشأ من المتعهد أو مورد المتعهد، والإيصال الأصلي لمرسلي الشحنة.
1.3.1.2. وفيما يخص البضائع التي تنقلها الطائرات المملوكة للقوات ******، إيصال موقع من الطيار الحكومي للطائرة الحكومية أو ممثله.
1.3.1.3. نموذج المواد المسلمة عبر البريد: نسخة من إيصال الاستلام للمواد من الحكومة.
1.3.1.4. وفيما يخص الخدمات: عبر إيصال استلام من الحكومة.
1.3.2. خدمات أو مشتريات خاصة أخرى: أمر شراء حكومي أو خطاب تعليمات، ونسخة من فاتورة المورد، وإيصال الاستلام من الحكومة، إن وجد.
1.3.3. الزكاة و/أو ضريبة الدخل: إقرار إدارة الضرائب أو شهادة إعفاء ضريبي تشهد بدفع الضرائب مصاحبة لفاتورة المتعهد.
1.3.4. الرسوم الإضافية:
1.3.4.1. قائمة مفصلة على فاتورة المتعهد بخصوص طبيعة كل الرسوم موضحة الرقم المرجعي للمادة وقيمتها، ويجب أن تصاحب هذه القائمة نسخ من فواتير الشحن لمورد التثبيت، إن وجدت.
1.3.4.2. في حالة رسوم شحن دولية، نسخة واحدة تامة من بوليصة الشحن/ فاتورة النقل الجوي التي تشير إلى المواد المشحونة، وكذلك تكاليف هذا الشحن.
1.3.4.3. في حالة التأمين الدولي، نسخة من شهادة التأمين مشيرة إلى المادة المؤمن عليها، وكذلك تكلفة التأمين. (ملاحظة: يُطلب من المتعهد التأمين فقط عند الطلب بشكل خاص كتابةً بواسطة الحكومة).
1.4. إن أمكن، يرسل المتعهد إلى البنك "قائمة ملخص" لكل شحنة تحتوي على المعلومات التالية في شكل أعمدة:
(أ) رقم شهادة المنشأ
(ب) رقم وتاريخ بوليصة الشحن/ فاتورة النقل الجوي/ فاتورة البيع
(ج) رقم فاتورة المتعهد
(د) قيمة فاتورة المتعهد
(ه) رقم أمر الشراء من المتعهد أو رقم العقد
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (د)
ضمان الدفعة المقدمة
إلى: [المستفيد]
خطاب الضمان رقم: [الرقم]
نضمن نحن، [اسم البنك]، بشكل غير مشروط وغير قابل للنقض أن ندفع لك مبلغ مليوني وخمسمائة وثلاثة وثمانين ألف وثلاثمائة وأربعة وثلاثين دولار أمريكي (2,583,334.00 دولار أمريكي) بما يمثل نسبة 5% من قيمة العقد المبرم بواسطة شركة هوكربيتشكرافت (المُشار إليها فيما يلي باسم "البائع") و****** (المُشار إليها فيما يلي باسم "المشتري") برقم [رقم العقد] بتاريخ [تاريخ العقد] (المُشار إليه فيما يلي باسم "العقد") وفقًا لما يلي:
(أ) عند استلام طلب مكتوب منك بصرف النظر عن الاعتراض من أي طرف آخر، ندفع لك فورًا المبلغ أعلاه أو المبالغ الأخرى التي يمكن أن تطلب منا دفعها، شريطة ألا تتخطى هذه المبالغ الإجمالي المذكور أعلاه، والذي قدره 2,583,334.00 دولار أمريكي عن طرق تحويله إلى حسابك البنكي لدى أي بنك في ******أو عبر أي طريقة أخرى مقبولة لديك.
(ب) أي مبالغ تم دفعها وفقًا لطلبك يجب أن تكون خالصة ومحررة من أي أعباء وبدون أي خصومات حالية أو مستقبلية مثل الضرائب على الدفع أو أو رسوم أو مصروفات أو إقطاعات أو خصومات أو اقتطاعات من أي نوع كان أو بواسطة أي كيان كان.
(ج) يُعدل المبلغ الذي يزيد عن 2,583,334.00 دولار أمريكي عند طلب البائع، وبدون تأكيد من المشتري أو طرف آخر بالطرق التالية:
(د) تكون الالتزامات المقدمة بموجب هذا الضمان (غير قابلة للنقض وغير مشروطة) التزامًا مباشرًا علينا. ولا نُعفى من جميع أو أي من هذه الالتزامات لأي سبب، بصرف النظر عن طبيعته أو أصله مثل التغيير في شروط العقد أو التمديد أو التغيير في مدى العمل المطلوب تنفيذه وطبيعته أو عدم تنفيذه أو اتخاذ أي إجراءات أو تدابير من طرفكم أو أي طرف ثالث يمكن أن تعفينا أو تحررنا من تنفيذ التزاماتنا ومسؤولياتنا المذكورة في هذا الضمان.
(ه) يظل هذا الضمان صالحًا حتى نهاية [اليوم] [الشهر] [العام] (المُشار إليه فيما يلي باسم "تاريخ الانتهاء"). ويُعتبر هذا الضمان ممتدًا بشكل تلقائي بدون تعديل لمدة عام من تاريخ الانتهاء أو أي تاريخ انتهاء مستقبلي، ما لم نبلغك بواسطة السويفت أو البريد المسجل أو خدمة النقل أن هذا الضمان لن يتم تجديده لأي فترة إضافية قبل عشر (10) أيام على الأقل من هذا التاريخ.
(و) نقر ونؤكد أن قيمة هذا الضمان لا تتخطى نسبة 20% من رأس المال المدفوع لهذا البنك والاحتياطات الرأسمالية الخاصة به.
(ز) يجب تحويل أي نزاع يخص هذا الضمان فقط إلى الهيئات المختصة وفقًا للقوانين واللوائح والتعليمات المذكورة في المملكة العربية السعودية.
___________________
[البنك]
المفوض بالتوقيع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ه) –تقرير حالة خطاب الاعتماد
تقرير الحالة ربع السنوي لخطاب الاعتماد
1. الرصيد الأولي (خطاب الاعتماد) _____________ دولار أمريكي
2. التمويل الإضافي (إن وجد) _____________ دولار أمريكي
3. إجمالي تمويل خطاب الاعتماد (1+2) _____________ دولار أمريكي
4. المبالغ المستلمة بموجب خطاب الاعتماد _____________ دولار أمريكي
5. الرصيد المتوفر (3-4) _____________ دولار أمريكي
6. المبلغ المفوتر، ولكن غير المدفوع _____________ دولار أمريكي
7. الالتزامات المعلقة _____________ دولار أمريكي
8. الرصيد المتاح لخطاب الاعتماد [5 -_6+7)] _____________ دولار أمريكي
9. القيمة المقدرة المطلوبة للاثني عشر شهرًا القادمة _____________ دولار أمريكي
التعليقات:
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (و)
شهادة مطابقة
رقم شهادة المطابقة: __________________
رقم العقد: __________________
رقم أمر الشراء: __________________
رقم قائمة التعبئة: __________________
نشهد بموجب هذه الشهادة أن البنود المذكورة في قائمة التعبئة المذكورة أعلاه مُصنعة ومُعاينة وفقًا للرسومات والمواصفات المعمول بها، وتتوافق مع شروط العقد.
المشتري: وزارة الدفاع
القوات __________ الملكية السعودية
فرع __________
الرياض __________
المملكة العربية السعودية
تفاصيل المتعهد: اسم الشركة وعنوانها
الرقم المرجعي: (___________________)
رقم خطاب الاعتماد: (___________________)
تؤكد الوزارة أن المتعهد قد أوفى بالتزاماته التعاقدية بموجب هذا العقد وفقًا للشروط والأحكام والمواصفات الفنية المحددة بواسطة الوزارة بتاريخ ___/ ___/ 1433ه الموافق ___/ ___/ 2012م. وبناءً على ذلك، تكون هذه الشهادة شهادة تسوية للعقد والإيصال النهائي لجميع محتوياته.
وبموجب هذه الشهادة، يحق للمتعهد تحصيل المبالغ المتبقية المستحقة من إجمالي قيمة هذا العقد وفقًا للبند رقم 4.3.1.5 من الشروط الخاصة.
إثباتًا لما تقدم، تم التوقيع بواسطة:
معالي قائد القوات الجوية معالي رئيس الأركان
صدقها
سلمان بن عبد العزيز
وزير الدفاع
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ح)
جدول التسليم
الرقم الوصف الكمية سعر الوحدة السعر الإجمالي تاريخ التسليم بعد تاريخ سريان العقد بالأشهر
الطائرة كينج أير (350 ER) الأولى 1 8,948,274 دولار أمريكي ديسمبر 2013
الطائرة كينج أير (350 ER) الثانية 1 8,948,274 دولار أمريكي يناير 2014
الطائرة كينج أير (350 ER) الثالثة 1 8,948,274 دولار أمريكي فبراير 2014
الطائرة كينج أير (350 ER) الرابعة 1 8,948,274 دولار أمريكي مارس 2014
توفير قطع الغيار مجموعة 2,826,026 دولار أمريكي 24 شهر بعد توقيع العقد
خلال التدريب وبعده غير مسعر
الدعم التشغيلي والصيانة مجموعة 13,047,544 دولار أمريكي 24 شهر بعد توقيع العقد وخلال فترة 36 شهر
الدعم التشغيلي والصيانة المقدم من قبل طرف آخر غير مسعر
إجمالي قيمة الشراء
إجمالي قيمة العقد 51,666,666 دولار أمريكي
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ط)
إجراءات المعاينة والقبول للمواد
يقوم المتعهد بأداء الاختبار والمعاينة العادية التي يتم إنجازها غالبًا على المواد بموجب هذا العقد. ويتم توقيع شهادات المعاينة والقبول التي تظهر نتائج اختبار المواد والأرقام المسلسلة بواسطة ممثلي المورد والحكومة إن أمكن خلال الاختبار. ويصدر المتعهد الشهادات التالية مع كل تسليم:
• شهادة ضمان
"نضمن بموجب هذه الشهادة أن المواد المذكورة فيها تطابق بالكامل العقد وأنها متوفرة بالكامل ومستوفاة للمواصفات المطلوبة في شروط التصنيع والمواد الخام. وفي حالة التأكيد على وجود أي عيوب فيها عند الاستلام أو في حالة عدم امتثالها للمواصفات المذكورة في العقد، نتعهد باستبدالها مجانًا وبدون تكلفة إضافية على الحكومة."
• شهادة مطابقة
- انظر الملحق (و) –نموذج شهادة المطابقة
• شهادة فحص
"نشهد بموجب هذه الشهادة أن جميع المواد الموردة والمفصلة فيه تطابق بالكامل مواصفات العقد، وأن هذه المواد جديدة وغير مستخدمة ومُصنعة حديثًا. كما نشهد أنه قد تم فحص المواد واختبارها من قبلنا قبل شحنها، وقد تم التوصل إلى أنها قابلة للاستخدام ومطابقة لجميع المواصفات والشروط الفنية المحددة في أمر الشراء."
• شهادة منشأ
"نشهد بموجب هذه الوثيقة أن جميع المواد الموردة والمفصلة فيه هي من أصل _______________"
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الملحق (ي)
شهادة القبول والتسليم لشحنة/ شحنات
المشتري: وزارة الدفاع
القوات ___________ الملكية السعودية
فرع ___________
الرياض ___________
المملكة العربية السعودية
المستخدم: وزارة الدفاع
القوات ___________ الملكية السعودية
فرع ___________
الرياض ___________
المملكة العربية السعودية
الرقم: (______________________)
رقم خطاب الاعتماد: (______________________)
نشهد بموجب هذه الوثيقة أن صناديق الشحن الجزئي/ الشحن رقم (______________________) الموردة بموجب بوليصة الشحن الجوي رقم (______________________) وفاتورة المتعهد رقم (______________________) بقيمة (______________________) دولار أمريكي، قد تم استلامها وقبولها عند التأكد من أن جميع الصناديق تتوافق مع المواصفات والتواريخ المذكورة في العقد.
تاريخ وصول الشحنة: ___________
الممثل: ___________ القائد: ___________
التاريخ: ___________
ممثل المورد: ___________
التوقيع: ___________
التاريخ: ___________
[مثبت ختم شركة هوكربيتشكرافت–كنساس]
الجزء الرابع –بيان طريقة العمل
طائرة الدفع التوربيني للاستخبارات والاستطلاع والمراقبة للقوات ******
قائمة المحتويات
1. مقدمة 15
2. تعريف الطائرة 15
3. التدريب 42
4. خدمات التدريب الأخرى 47
5. الوثائق والتسليمات 48
6. خدمة النسخ المعدلة 50
7. الضمان 51
8. الصيانة/ الدعم التشغيلي 52
9. توفير قطع الغيار 52
10. العمليات والصيانة والجاهزية التشغيلية 52
11. تسليم طائرات كينج أير 350 إي أر والموافقة عليها 53
1. مقدمة
1.1. تشترط ****** شراء (4) طائرات مُصنعة حديثًا وغير مستعملة مسبقًا من طراز كينج أير 350 إي أر (إفايهايه موديل بي 300) بتجهيزاتها ذات الصلة المفصلة في الفقرة الثانية في تعريف الطائرة، ومجهزة بمحركات دفع توربيني فئة PT6A-60A مصنعة من قبل شركة برات أند ويتني كندا المحدودة، وكذلك قطع الغيار، وخدمات الدعم الفني، وخدمات التدريب والصيانة. ولدعم هذه الطائرات، يحدد بيان طريقة العمل هذا أيضًا الخدمات الإضافية التي يزودها المتعهد في الجزء الخامس من هذا العقد. ويتحمل المتعهد مسؤولية تزويد الطائرات بالبنود والخدمات المذكورة في هذا العقد.
2. تعريف الطائرة
2.1. الوصف العام –أربع (4) طائرات تنفيذية من طراز كينج أير 350 إي أر (إف ايه موديل بي 300) بمحرك دفع توربيني مزدوج تنتفع من كامل الهيكل المعدني. وتضم كل طائرة المؤن من أجل تسعة ركاب وأمتعتهم بالإضافة إلى طاقم مكون من فردين. وكل طائرة مجازة للتشغيل بواسطة طيار واحد مع تصميم داخلي مصقول يمكن تعديله بسهولة بعد التسليم. وتشتمل كل طائرة على منطقة غسيل خاصة تشتمل على مرحاض مطوق مجاز بالكامل للشَغل أثناء الإقلاع وأثناء الرحلة وأثناء الهبوط. وينبغي أن تكون جميع الطائرات مجازة وفقًا للوائح الطيران الفيدرالية –الجزء 23 –فئات الركاب.
2.2. الأبعاد
الأبعاد
الارتفاع الكلي 14 قدمًا و4 بوصات (4.37م)
الطول الكلي 46 قدمًا و8 بوصات (14.22م)
الجناح
المروحة (كلية) 57 قدمًا و11 بوصة (17.65م)
المساحة 310 قدم مربعة (28.8 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 250/0)، 0.0 درجة امتداد، 0.0 درجة
الزاوية الثنائية 6.0 درجة 6.0 درجة
النسبة الباعية 10.8
متوسط الوتر الديناميكي الهوائي 5 أقدام و10 بوصات (1.78م)
الذيل الأفقي الذيل الأفقي
المروحة (كلية) 18 قدمًا و5 بوصات (5.61م)
المساحة 68 قدمًا مربعًا (6.32 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 25%) 17 درجة
الزاوية الثنائية 0 درجة
النسبة الباعية للذيل الرأسي
المساحة 52.3 قدمًا مربعًا (4.86 متر مربع)
الامتداد (عند وتر 25%) درجة 37.1 درجة
النسبة الباعية 1.1
المقصورة
إجمالي الطول المضغوط 24 قدمًا و10 بوصات (7.57م)
الطول (باستثناء مقصورة الطيار) 19 قدمًا و6 بوصات (5.49م)
الارتفاع (الحد الأقصى) 4 أقدام و9 بوصات (1.45م)
العرض (الحد الأقصى) 4 أقدام و6 بوصات (1.37م)
العرض –على الأرض 4 أقدام و1 بوصة (1.24م)
باب الدخول
الارتفاع (الحد الأدنى) 4 أقدام و3.5 بوصات (1.31م)
العرض (الحد الأدنى) 2 قدم و3 بوصات (0.68م)
2.2.1. أوزان التصميم وسعاته
2.2.1.1. الحد الأقصى لوزن المهبط 16,600 رطل (7,530 كجم)
2.2.1.2. الحد الأقصى لوزن الإقلاع 16,500 رطل (7,484 كجم)
2.2.1.3. الحد الأقصى مع عدم وجود وقود 13,000 رطل (5,897 كجم)
2.2.1.4. الحد الأقصى لوزن الهبوط (فئات الركاب) 15,675 رطل (7,110 كجم)
2.2.1.5. سعة الوقود (المستخدم) عند 6.7 رطل لكل جالون أمريكي 5,192 رطل (2,355 كجم)
2.2.1.6. الوزن الأساسي للطائرة فارغة* 9.356 رطل (4,244 كجم)
يشتمل الوزن الأساسي للطائرة فارغة على الوقود غير المستخدم والزيت والتصميم الداخلي المصقول والإلكترونيات وأقفال الوقود لكُنة الجناح.
2.3. الأداء
2.3.1.1. تقوم جميع بيانات الأداء على الطائرة القياسية والأحوال الجوية القياسية الدولية. وتقوم أطوال الإقلاع والهبوط على المستوى، السطح الصلب والممرات الجافة مع عدم وجود رياح.
2.3.1.2. المدى (±3%)، السرعة العادية للتطواف 2,288 نانومتر (4,237 كم)
ملاحظة: 1 طيار +4 ركاب. ويسمح المدى بالتدرج والإقلاع والتسلق والتطواف والهبوط، وتستبقي قواعد الطيران الآلي الخاصة بالرابطة الوطنية لطيران رجال الأعمالوضع قدره 100 نانومتر بديلة).
2.3.1.3. سرعة التوقف (تجهيز الهبوط)
(عند 15,000 رطل/ 6,804 كجم) 81 ألف طن (150 كم/ ساعة) الحالات الجوية القياسية الدولية
2.3.1.4. الحد الأقصى لارتفاع التشغيل 35,000 قدم (10,668م)
2.3.1.5. طول ميدان الإقلاع
(ملاحظة: لوائح الطيران الفيدرالية 23 (فئات الركاب)، ومستوى البحر، والحالات الجوية القياسية الدولية، وأسلوب القلابات، وتكييف الهواء ونزيف الهواء، 16,500 رطل -7,530 كجم) 4,473 قدم (1,363م)
2.3.1.6. مسافة الهبوط
(ملاحظة: لوائح الطيران الفيدرالية –فئات الركاب، ومستوى البحر، والحالات الجوية القياسية الدولية، 15,675 رطل -7,110 كجم) 2,980 قدم (908م)
2.3.1.7. السرعة العادية للتطواف (±3%)
(ملاحظة: الحالات الجوية القياسية الدولية –ارتفاع 24,000 قدم (7,315م)، 13,500 رطل (6,123 كجم)، والحد الأقصى لطاقة التطواف 1,500 دوران في الدقيقة) 302 ألف طن (559 كم/ ساعة)
2.3.1.8. الضوضاء في الإقلاع
(ملاحظة: بيانات التضخيم وفقًا للملحق (ز) من 14 قانون اللوائح الفيدرالية 36 أو الملحق 16 من منظمة الطيران المدني الدولي –الفصل 10) 81,45 ديسبل
2.4. معايير التصميم الهيكلي
2.4.1.1. جناح الطائرة كينج أير 350 إي أر وجسمها من الطراز التقليدي بجسم شبه أحادي، ويضم بأجنحة مدعومة ومجموعة ذيل على شكل T. ومعظم الهياكل مصنعة من مزيج الألومنيوم عالي القوة. وتُستخدم المواد الصلبة والمواد الأخرى وفق الحاجة. ويقوم التصميم على مفاهيم تفاوت تحمل الأضرار. وهيكل الطائرة مجازً لتفاوت تحمل الأضرار (عمر غير محدود) بما يضمن استمرار السلامة الهيكلية عبر برنامج الفحص وإجراءات الصيانة المناسبة. وينقسم هيكل الطائرة إلى ثلاثة مكونات رئيسة: الهيكل والجناح ومجموعة الذيل.
2.4.1.2. حدود الحمل لمناورة التصميم هي تقريبًا -1.21 إلى +3.01جم.
2.4.1.3. في الحد الأقصى لارتفاع التشغيل المقدر بـ 35,000 قدم (10,668م)، يكون فرق ضغط المقصورة الضئيل 6.5 ± 0.1 رطل لكل بوصة مربعة بما يوفر ارتفاع للمقصورة قدره 10,380 قدم (3,164م).
2.4.1.4. حدود السرعات
2.4.1.4.1. أقصى سرعة للتشغيل
(عند مستوى البحر 24,000 قدم (7,315م) 245 عقدة للسرعة الجوية المبينة (454 كم/ ساعة)
2.4.1.4.2. أقصى سرعة للتشغيل
(24,000 قدم (7,315م) إلى 35,000 قدم (10,668م) 245 إلى 192 عقدة للسرعة الجوية المبينة (454 إلى 356 كم/ ساعة)
2.4.1.4.3. أقصى تشغيل ماخ 0.58م
2.4.1.4.4. سرعات تمديد القلابات
2.4.1.4.4.1. سرعة اللوحات الممتدة (الاقتراب) 202 عقدة للسرعة الجوية المبينة (374 كم/ ساعة)
2.4.1.4.4.2. سرعة اللوحات الممتدة (الهبوط الكامل) 158 عقدة للسرعة الجوية المبينة (293 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5. سرعة التشغيل والتمديد لتروس الهبوط
2.4.1.4.5.1. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (التمديد) 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة (337 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5.2. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (الانسحاب) 158 عقدة للسرعة الجوية المبينة (293 كم/ ساعة)
2.4.1.4.5.3. الحد الأقصى لتشغيل تروس الهبوط (تشغيل الطوارئ) 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة (337 كم/ ساعة)
2.4.1.4.6. مدى مركز الجاذبية
2.4.1.4.6.1. الحد الأمامي إلى 11,800 رطل (5,352 كجم) 7.8% ماك
2.4.1.4.6.2. الحد الأمامي إلى 16,500 رطل (7,484 كجم) 24.8% ماك
2.4.1.4.6.3. الحد الخلفي 31.7% ماك
2.5. جسم الطائرة
2.5.1.1.1. جسم الطائرة مصنع من مزيج الألومنيوم عالي القوة مع استخدام مناسب للمواد الصلبة والمواد الأخرى. ويقوم التصميم الهيكلي على مبادئ التفاوت لتحمل الأضرار (القصور –السلامة) باستخدام مسارات حمل متعددة وألواح مزدوجة ملصوقة وألواح بأحجام صغيرة على الهيكل الأساسي.
2.5.1.1.2. الجسم متعدد الهياكل مشكل لتوفير مقصورة مثالية وراحلة للركاب. وأقصى عرض للمقصورة من الداخل هو 4 أقدام و6 بوصات (1.37م) وأقصى ارتفاع للمقصورة 4 أقدام و9 بوصات (1.45م).
2.5.1.1.3. ينقسم الجسم إلى ثلاثة أقسام: قسم المقدمة غير المضغوطة، وقسم سطح الطائرة المضغوط والمقصورة، وقسم الذيل غير المضغوط.
2.5.1.2. قسم المقدمة
2.5.1.2.1. يوفر قسم المقدمة المساحة المتوفرة للمعدات الإلكترونية، وهوائي رادار الطقس، وأضواء الهبوط، وترس هبوط المقدمة. وتقع المعدات الإلكترونية في القسم العلوي من بائكة المقدمة ويمكن الدخول إليها عبر أبواب الدخول إلى المقدمة في الجانبين الأيمن والأيسر القابلين للقفل. ويقع ترس هبوط المقدمة وأضواء الهبوط في بئر العجلة في القسم السفلي من المقدمة.
2.5.1.3. قسم المقصورة المضغوطة
2.5.1.3.1. تحتوي مقصورة الطيار ومقصورة الركاب على قسم مضغوط من جسم الطائرة. ويمتد الوعاء المضغوط من الحاجز المضغوط الأمامي إلى الحاجز المضغوط الخلفي، ويضم حد أقصى لفرق الضغط التشغيلي قدره 6.6 رطل لكل بوصة. ويقع باب دخول المقصورة بالجانب الأيسر الخلفي من الجسم، في حين أن الجانبين الأماميين الأيسر والأيمن في الجسم يضمان أبواب خروج الطوارئ.
2.5.2. قسم الذيل
2.5.2.1. يحتوي قسم الذيل على مساحة من أجل زجاجة الأكسجين ومسجل الصوت في المقصورة.
2.5.3. نوافذ مقصورة الطيران
2.5.3.1. يكون الزجاج الأمامي من الزجاج والأكريليكالمشطر، ومضادة للجليد باستخدام عناصر الحرارة الإلكترونية بين ألواح الزجاج. ويتم تحقيق إزالة المطر على الأرض وأثناء الطيران على سرعة منخفضة باستخدام ماسحات الزجاج الأمامي الإلكترونية الميكانيكية.
2.5.4. الجناح
2.5.4.1.1.1. الجناح من الهيكل شبه الأحادي ضامًا عوارض من طرف الجناح إلى طرف الجناح. وتكون العوارض الأمامية والخلفية مشابهة في الإنشاء الذي يضم سحب الغطاء وأعضاء التقوية والسير المعدنية. ويحتوي القسم الداخلي على مجموعة من رافعات القنوات مركبة بشكل متتابع، ومصنوعة من 7075 لوح ألومنيوم، ومطروقة من أجل تركيبات العوارض الأمامية والخلفية. وتُرفق الأجنحة بالقسم المركزي للجناح في هذه التركيبات باستخدام ثمانية مزالج. ويتم تركيب تركيبات إرفاق ترس الهبوط الرئيس بالعارضة الخلفية. ويتم تركيب القلابات والجنيحات على الجناح.
2.5.4.2. تُرفق القلابات الأربعة بحواف الجر في الجناح. وتُرفق القلابات بمجموعات القضبان في الحواف الداخلية من الجناح. وتحتوي القلابات على عوارض أمامية وخلفية وعروق معدنية وألواح جانبية وغطاء ايرودينامي.
2.5.4.3. تعمل قلابات الجناح كهربائيًا باستخدام محرك كهربائي للقلاب. ويتم تزويد آلية السلامة لفصل الطاقة على المحرك الكهربائي للقلاب في حالة حدوث حالة غير مماثلة. ويعمل نظام القلاب بواسطة رافعة التحكم في القلاب الموجودة على القاعدة المركزية. وتضم رافعة التحكم في القلاب ثلاثة مواضع: علوي، واقتراب، وسفلي.
2.5.4.4. يتم تركيب الجنيحات بالإنشاء المركب في طرف الجناح لتحسين الأداء. وتتواجد إضاءة التمييز في الحافة الأمامية من كل طرف جناح.
2.5.5. مجموعة الذيل
2.5.5.1. تحتوي مجموعة الذيل على مثبت رأسي ومثبت أفقي عرضي ثابت في تصميم على شكل T، وتُرفق الرافعات إلى حافة الجر من المثبت الرأسي ويتم تشغيلها عبر مجموعة كابل/ بكرة موصلة بعمود التحكم. وتُرفق دفة التوجيه بحافة الجر من المثبت الرأسي. ويُرفق سطح تعديل الموازنة لدفة التوجيه بحافة الجر السفلية بدفة التوجيه.
2.5.5.2. يتم فك الجليد من الحواف الأمامية للمثبت الأفقي باستخدام معدات أجهزة الجليد المملوءة بالهواء المضغوط.
2.5.5.3. يقع المصباح المومض الأبيض بالجانب العلوي من المثبت الرأسي، ويقع مصباح وضع الذيل الأبيض على الجانب العلوي في قسم المؤخرة بالمثبت الرأسي. ويقع مصباح تدفق الذيل على السطح السفلي في المثبت الأفقي لإضاءة المثبت الرأسي.
2.5.6. ترس الهبوط
2.5.6.1. تُعتبر الطائرات كينج أير 350 إي أر مجهزة بترس هبوط ثلاثي العجلات قابل للسحب. ويستخدم ترس الهبوط الرئيس الهواء العادي على دعامات الزيت، ويُسحب إلى الامام في كل كنة محرك. يستخدم ترس المقدمة الهواء العادي على قفل صدمات الزيت ويُسحب إلى الخلف تجاه قسم المقدمة. ويتم التحكم في ترس الهبوط كهربائيًا، ويتم تحريكه هيدروليكيًا، ويتم غلقه بواسطة الأبواب المحركة ميكانيكيًا.
2.5.6.2. يمكن أن يمتد ترس الهبوط عند سرعات تصل إلى 182 عقدة للسرعة الجوية المبينة أو يُسحب في سرعات تصل إلى 164 عقدة للسرعة الجوية المبينة. ويوفر موضع ترس الهبوط ونظام الإنذار المؤشرات البصرية والسمعية لموضع ترس الهبوط. ويقع ضوء المؤشرات الخضراء الثلاثة بجوار مقبض التحكم في ترس الهبوط، ويقع ضوء الإنذار الأحمر في مفتاح مقبض الترس.
2.5.6.3. يتم إنجاز تمديد بديل لترس الهبوط بواسطة نظام يدوي يتطلب أن يتم خفض ترس الهبوط باستخدام مقبض تمديد بديل.
2.5.6.4. ولتسهيل تجهيز الوزن الكلي الزائد، تم تجهيز الطائرة من طراز كينج أير 350 إي أر بتروس هبوط للتشغيل الثقيل يوفر سعة حمل دعامة متزايدة، كما يتم استبدال الإطارات والعجلات الخاصة بترس الهبوط الرئيس للطائرة كينج أير 350 بعجلات من مزيج الألومنيوم المصبوب 6.50×10 بعدد 10 إطارات أنبوبية 22×6.75، 10 إطارات رقائقية.
2.5.7. توجيه المقدمة
2.5.7.1. يتم تحريك توجيه المقدمة بواسطة مدوس الدفة لتوفير تحكم التوجيهي على الأرض. وتكون أقصى حد لزاوية التوجيه المتوفرة 49 درجة إلى اليسار أو اليمين. وتكون زاوية الربط الميكانيكي لربط مدوس الدفة 14 درجة إلى اليسار و12 درجة إلى اليمين مع التوجيه الإضافي المطلوب عبر استخدام كبح تفاضلي وضغط غير متماثل.
2.6. المكابح
2.6.1. الطائرة مجهزة بأربع مجموعات تعمل هيدروليكيًا بمكابح معدنية مبطنة ومتعددة الأقراص، واحد في كل عجلة ترس رئيس. وتُستخدم المكابح بواسطة ضغط طرفي على مدوس الدفة الخاص بالطيار أو الطيار المساعد. ويتم تركيب المكابح المضادة للتجميد قياسية.
ملاحظة: يُسمح بتغطية نظام إذابة الجليد على العجلات أثناء التواجد في المملكة. ومن غير الشائع لصمامات الإغلاق الهوائي لنظام إذابة الجليد في المكابح أن يحدث تسريب مفرط أو أن تعلق أثناء أداء الطيارين لإجراءات تشغيل المحرك أو الطيران. فهذا يزيد من درجة حرارة التوربين الداخلي للمحرك وتدفق الوقود فيه.
2.7. محطات الطاقة
2.7.1. يتم تشغيل الطائرات كينج أير 350 إي أر بواسطة كنة محرك مركبة على المحركات ذات الدفع التوربينيPT6A-60A المُصنعة بواسطة شركة برات أند ويتني كندا ليمتد. وهذا المحرك هو توربين حر (لا يتم توصيل مولد البنزين وأجزاء توربين الطاقة بشكل مادي)، ولذا تكون شروط الطاقة خلال تشغيل المحرك منخفضة نسبيًا. ويولد كل محرك PT6A-60A سعة 1,050 حصان في اليوم العادي بمستوى البحر.
2.7.2. يمكن أن يبدأ المحرك العمل باستخدام بطارية الطائرة أو الطاقة الخارجية.
2.7.3. يعمل نظام مراقبة الحريق في الدائرة الكهربائية المغلقة على مراقبة حجرة المحرك لاكتشاف الحريق والإنذار به في حالة حدوثه. ويتم تزويد نظام إطفاء حريق للمحرك.
2.7.4. أجهزة تحكم نظام الدفع
2.7.4.1. يعمل نظام الدفع بواسطة ثلاثة مجموعة من أجهزة التحكم: رافعات الطاقة، ورافعات المروحة، ورافعات الحالة. تعمل رافعات الطاقة على التحكم في طاقة المحرك، وتعمل رافعات الحالة على التحكم في تدفق الوقود في مخرج ضبط الوقود، ويختار فصل الوقود والتوقف المنخفض ووظائف التوقف المرتفع. وتعمل رافعات المروحة بشكل تقليدي وتتحكم في مراوح السرعة المستمرة عبر ضابط رئيس.
2.7.5. رافعات الطاقة
2.7.5.1. توفر رافعات الطاقة التحكم في طاقة المحرك من التوقف عبر انقطاع الطاقة بواسطة تشغيل ضابط مولد البنزين في وحدة ضبط الوقود، وينتج من سرعة لفات ضابط مولد البنزين زيادة طاقة المحرك.
2.7.6. رافعات المروحة
2.7.6.1. تضبط كل رافعة مروحة ضابط المروحة بما ينتج عنه زيادة سرعة المروحة أو خفضها. وفيما يخص دوران نصل المروحة، تطلق كل رافعة مروحة زيت ضغط عالِ من المرحة بما يسمح للموازنة ونابض دوران نصل المروحة من تغيير درجة الميل. وتعمل الحابسة في الجانب الخلفي من مدى تحرك الرافعة على منع الحركة غير المقصودة في مدى دوران نصل المروحة. وفي الرحلة، يكون مدى التشغيل من 1,450 إلى 1,700 لفة في الدقيقة.
2.7.7. رافعات الحالة
2.7.7.1. تضم رافعات الحالة ثلاثة مواضع: قطع الوقود، والتوقف المنخفض، والتوقف المرتفع، وتتحكم كل رافعة في وظيفة فصل الوقود من وحدة ضبط الوقود، ويحد سرعة التوقف
2.8. المراوح
2.8.1. كل محرك مجهز بأربعة شفرات قطر كل منها 105 بوصة من نوع هارتزل تقليدية ونصل حركة كامل ومروحة بدوران كامل للنصل وسرعة ثابتة وتوازن وعكسية بانحراف متغير، ومركبة على عمود المخرج الخاص بعلبة تروس التخفيض. يتم التحكم في انحراف المروحة وسرعتها بواسطة ضغط زيت المحرك عبر ضوابط إجراء فردي مدفوعة بالمحرك. يعمل الموازن بالطارد المركزي الذي يساعده نابض دوران النصل، بتحريك الشفرات نحو سرعة منخفضة (انحراف مرتفع) وفي وضع دوران النصل. ويعمل الضابط الذي يعزز ضغط زيت المحرك على تحريك المروحة إلى سرعة مرتفعة (انحراف منخفض) في وضع التوقف الهيدروليكي والحركة الخلفية. لا تمتلك المراوح توقفات على سرعة منخفضة (انحراف مرتفع) بما يسمح للشفرات بالدوران بعد إيقاف المحرك.
2.8.2. وتُزود الأنابيب المربوطة بالمروحة للاستخدام على الطائرة المربوطة لمنع الدوران كطاحونة الهواء في ضغط زيت صفر.
2.8.3. دوران النصل الأوتوماتيكي للمروحة
2.8.3.1. مع تفعيل نظام دوران النصل الأوتوماتيكي للمروحة، في الحالات غير المرجحة لقصور المحرك خلال الإقلاع، تقوم المروحة الموجودة على هذا المحرك بالدوران أوتوماتيكيًا.
2.8.4. المطوار المتزامن
2.8.4.1. تمتلك الطائرات كينج أير 350 إي أر نظام مطوار متزامن، لا يعمل فقط على مزامنة سرعة المروحة، ولكن أيضًا على توجيه مواضع الشفرات بحيث لا تمر شفرات المروحة اليمنى واليسرى بالجسم في الوقت نفسه. وهذا يمنع ضوضاء الطرق في بعض الأوقات في الطائرات ذات المحرك المزدوج بدون طور. ويُعرض هذا النظام على شاشة متعددة الوظائف.
2.9. النظم
2.9.1. أجهزة تحكم الطائرة
2.9.1.1. يتم تزويد أجهزة تحكم بالرحلة ثنائية، ويكون نظام التحكم الرئيس بالتصميم التقليدي ويعمل يدويًا عبر كابلات تحكم، وقضبان دفع وسحب وروابط ميكانيكية تزود الانحراف والميل والانعراج. ويتم التحكم في ارتفاع الانحراف للطائرة بواسطة الرافعات. ويتم التحكم في الميل بواسطة الجنيح. ويتم التحكم في الانعراج باستخدام دفة القيادة.
2.9.1.2. يوفر نظام التحكم الثانوي موازن كهربائي ونظام انحراف وموازن ميل من أسطح موازنة الميل التي تعمل يدويًا، وكذلك موازن انعراج من أسطح موازنة دفة القيادة التي تعمل يدويًا.
2.9.1.3. تشتمل دفة القيادة على تروس معدلة للسان دفة القيادة لتوفير لسان مضاد للمؤازرة في دفة القيادة مع مدى حركة إضافي لدعم الثبات التوجيهي المحسن للطائرة.
2.9.1.4. يتم تثبيت نظام تعزيز دفة القيادة وتجهيزه بمفتاح قائم تحكم مركب إلى وضع تعزيز دفة القيادة. يحس النظام بعزم دوران المحرك من المحركين. وعند تخطي التفاوت في عزم الدوران إلى مستوى معد مسبقًا، يتم تفعيل المؤازر الكهربائي ويسبب انحراف الدفة بما يساعد الطيار.
2.9.1.5. هناك أربعة قلابات مركبة على الأجنحة، حيث تتحرك القلابات في مسارات مدفوعة بآلية الدفع على الدعامة الخلفية للجناح. ويتم تحريك قلابات الجناح كهربائيًا وتوصيلها بشكل داخلي بواسطة نظام السلامة لضمان التشغيل المتماثل. ويتم التحكم في نظام القلاب بواسطة رافعة التحكم في القلاب الموجود في القاعدة المركزية.
2.9.2. نظام الوقود
2.9.2.1. تتميز الطائرات كينج أير 350 بنظام وقود تقليدي بسعة كبيرة يحتاج إلى حد أدنى من الإدارة، وتكون إدارة الوقود أوتوماتيكية في التشغيل العادي.
2.9.2.2. يوفر نظام الوقود إمداد وقود مستقل لكل محرك ومصمم لعمل على ارتفاع 35,000 قدم في درجة حرارة تتراوح بين -40 درجة مئوية إلى +50 درجة مئوية في نفاث الوقود A أو نفاث الوقود A-I أو نفاث الوقود B أو JP-4 أو JP-5 أو JP-8. وتتوافق جميع المكونات في نظام الوقود مع جميع أنواع الوقود المعتمدة للمحرك PT6A-60A.
2.9.2.3. يحتوي نظام الوقود على نظامين مختلفين متصلين بواسطة خط تغذية متقاطع بتحكم صمامي، وينقسم نظام الوقود لكل محرك على نحو إضافي إلى نظام وقود رئيس وملحق ومدى ممتد. ويحتوي النظام الرئيسي لخزان الوقود الداخلي على خزانين بحافة أمامية لجناح الطائرة، وخزانين بنفاخة قسم الصندوق، وخزان تكميلي (خلية سائلة)، وترتبط جميعها داخليًا بالتدفق في خزان كنة الوقود بواسطة الجاذبية. وتُملأ الخزانات من المالئ القريب من طرف الجناح.
2.9.2.4. يحتوي نظام الوقود الملحق على خزان قسم مركزي مع فتحة ملء خاصة به ونظام تحويل وقود أوتوماتيكي لتحويل الوقود إلى نظام الوقود الرئيس.
2.9.2.5. توفر خزانات الوقود بالمدى الممتدة 118 جالونٍ إضافي من الوقود من كل منهم (بإجمالي 236 جالون قابل للاستخدام) زيادةً على ما هو قياسي للطائرات كينج أير 350، وتمتلك فتحات ملء خاصة بها. ويتم تغذية الوقود من هذه الخزانات في خزانات كنة وقود داخلية. وعند ملء خزانات المدى الممتد، يتم استهلاك الوقود الموجود في هذه الخزانات أولًا.
2.9.2.6. تُركب مضحة الوقود المدفوعة بالمحرك (الضغط المرتفع) على صندوق ملحق متصلًا بوحدة ضبط الوقود. ومضخة التعزيز الرئيسة (الضغط المنخفض) تكون مدفوعة أيضًا بالمحرك.
2.9.3. النظام الهيدروليكي
2.9.3.1. يتم تشغيل النظام الهيدروليكي بواسطة مضخة مدفوعة بمحرك كهربائي، ويقوم بتزويد ضغط هيدروليكي لسحب ترس الهبوط وتمديده.
2.9.4. النظام الكهربائي
2.9.4.1. يتم تزويد الطائرة بالطاقة الكهربائية بواسطة مولدي بدء تشغيل مدفوعين بالمحرك 280 فولت تيار مباشر 300 أمبير، وتقوم البطارية الحمضية الرصاصية A 24 فولت، 42 أمبير في الساعة بتزويد الطاقة الكهربائية لتشغيل المحرك ولحالات الطوارئ. يتم تزويد حوض الطاقة الكهربائية A 28 فولت تيار مباشر الموجود أسفل الجناح الأيمن خارج الكنة من أجل توصيل وحدة الطاقة الخارجية.
2.9.4.2. يتم توزيع الطاقة الناتجة من هذه المصادر عبر نظام توزيع الطاقة الكهربائية بالتيار المباشر، بما يزود الطاقة لأحمال الطاقة الكهربائية المنفردة عبر نظام متعدد الأنابيب. ويتصل كل مصدر طاقة بنظام التوصيل كهربائيًا عبر محامل وموصلات خطية.
2.9.4.3. يقوم المحول A 500 فولت –أمبير في أصل قاعدة الجناح الأيمن بتوفير طاقة تيار متغير 15 فولت 60 هيرتز لأربعة مخارج كهربائية تقع في المقصورة (ملحوظة: يمكن استخدام مخرجين فقط في الوقت نفسه.
2.9.5. تكييف الضغط والنظام البيئي
2.9.5.1. يستخدم تكييف الضغط والنظام البيئي هواء النزف لتكييف ضغط المقصورة وحرارتها، وإزالة الضباب عن نوافذ المقصورة. وخلال العمليات العادية، تكون معظم العمليات أوتوماتيكية. وتكون حالات الضبط اليدوي مطلوبة فقط للراحة الفردية، مثل ارتفاع المقصورة ومعدل ارتفاعها ودرجة حرارتها.
2.9.5.2. يتم تكييف ضغط المقصورة بواسطة تدفق الهواء من قمرة القيادة ومخارج هواء المقصورة. ويستخدم النظام جهاز ضبط متساوي الضغط متغير لدفع صمام التدفق عبر محمل هوائي. ويُفتح كل من صمامي التدفق الخارجي والسلامة بشكل أوتوماتيكي إلى أقصى حد من الضغط المتفاوت لحماية المقصورة من زيادة الضغط.
2.9.5.3. تتكون خطوط توزيع الهواء في المقصورة من أنابيب الهواء البارد وأنابيب الهواء الساخن. ويتم تسليم الهواء المُعاد تدويره و/أو المكيف إلى قمرة القيادة والمقصورة أعلى منافذ مقلة العين ودرع الوهج في قمرة القيادة. وفي حالة الحاجة إلى طاقة تبريد إضافية، يتم تحويل مسار بعض الهواء المكيف إلى التدفق خارج المنافذ السفلية بالمقصورة بواسطة جهاز ضبط درجة الحرارة. ويتم توصيل الهواء الساخن عبر المنافذ الأرضية بالمقصورة على الجانبين وإلى درع التوهج. ويكون نظام ضبط درجة الحرارة في صورة وحدة تحكم رقمية تنظم درجة حرارة الهواء الذي يتم توصيله إلى المقصورة وقمرة القيادة أوتوماتيكيًا. ويمكن ضبط درجة حرارة المقصورة وقمرة القيادة بشكل منفصل، ويمكن أن يحافظ النظام على تدفئة أو تبريد المقصورة وقمرة القيادة في درجة حرارة ثابتة خلال الارتفاع والهبوط. ويوجد أجهزة ضبط لدرجة الحرارة في المقصورة وقمرة القيادة بشكل منفصل موجودة في قمرة القيادة، حيث توفر القدرة على تنظيم درجات الحرارة في كلا المنطقتين.
2.9.6. نظام الأكسجين
2.9.6.1. يوفر نظام الأكسجين سعة 115 قدم مكعبة تدفق مناسب للأكسجين لكل من الطاقم والركاب من أجل ارتفاع ضغط المقصورة إلى 35,000 قدم. ويحتوي النظام على مجموعة منظم أسطواني للأكسجين مركب في قسم الذيل.
2.9.6.2. ويتم تزويد الطاقم بأقنعة أكسجين سريعة الارتداء، ويتم تزويد الأكسجين للركاب عبر أقنعة منسدلة تهبط تلقائيًا في حالة ارتفاع المقصورة إلى 12,500 قدم.
2.9.7. نظام الحماية من الجليد والأمطار
2.9.7.1. لا يُستخدم نزف هواء المحرك في الحماية المضادة للجليد لمأخذ المحرك. ويُستخدم عادم المحرك (يعمل دائمًا) للحواف الساخنة للمحرك. ويتم تزويد حماية الجناح والحواف المرشدة في المثبت الأفقي عبر هواء النزف دافعًا استخدام أغطية إزالة جليد هوائية. ويستخدم نظام إزالة الضباب في الزجاج الأمامي الهواء المزود من نظام تكييف الهواء. ويتم تسخين الزجاج الأمامي وصاري بيتو وتهوية الوقود والمراوح ودليل تحذير فقدان السرعة تلقائيًا.
2.9.7.2. يتم تحقيق إزالة مياه الأمطار باستخدام تطبيق ختم السطح، وكذلك يتم تزويد نظام مسح للزجاج الأمامي كهروميكانيكي لإزالة مياه الأمطار على الأرض وفي عمليات الطيران بسرعة منخفضة.
2.9.8. أغطية الوقاية
2.9.8.1. مركب شريط وقاية 3MTMعلى الحافة المرشدة للمثبت الرأسي، وكلا حافتي المثبتات الأفقية، والأجنحة، ودرعي التوهج المضيء في طرف الجناح، والسطحين الانسيابيين لالتفاف الجناح، ومأخذ تكييف الهواء. ومركب غطاء وقاية 3MTM على غطاء هوائي الرادار وكرة المثبت الرأسي –أكزو نوبل. ويتم تطبيق غلاف حماية هوائي في داخل كوة المحرك وخارجها على الحافة المرشدة في الجناح. ويتم تطبيق طبقة إضافية من ختم القفل حول الطرف الخارجي للزجاج الأمامي، سواء في منافذ المحرك وجميع النوافذ (مع استثناء نوافذ العواصف).
2.10. حجرة الرحلة والإلكترونيات
2.10.1. الطائرات من طراز كينج أير 350 إي أر مجازة للتشغيل بواسطة طيار واحد أو طيارين، وجميع أجهزة التحكم والمفاتيح موجودة لإمكانية الوصول بواسطة أي من الطيارين، وتتواجد قواطع الدوائر الكهربائية في الجدار الجانبي للطيار ومساعد الطيار، ومحددة بشكل واضح لتدل على القضيب الكهربائي ذي الصلة المزود منه الطاقة.
2.10.2. لوح التحكم في الإضاءة العلوي يقع بين الطيارين، ويضم جميع مفاتيح تشغيل الإضاءة وإطفائها في لوح آلي. ويحتوي اللوح العلوي الثاني على أجهزة قياس لمراقبة حمل المولد وأجهزة تحكم آلية في الإضاءة من أجل الطوارئ.
2.10.3. يقوم لوح إعلان التحذير (اللون الأحمر) مركزيًا في درع التوهج بتزويد إعلان النظام، ويوجد لوح إعلان التنبيه/ التوجيه/ الحالة (التنبيه باللون الأصفر، والتوجيه باللون الأخضر، والحالة باللون الأبيض) في لوح فرعي مركزي. واللمبات الوامضة للتحذير الرئيس الموجودة في درع التوهج هي جزء من النظام مثل اللمبات الوامضة للتنبيه الرئيس باللون الأصفر (تتواجد في الداخل فقط في اللمبات الوامضة للتحذير الرئيس).
2.10.4. يتم تزويد قاعدة مركزية ممتدة مع ألواح فارغة لتسهيل تركيب رؤوس التحكم ومعدات المهمة الأخرى خلال برنامج تجهيز الطائرة للمهمة.
2.10.5. الإلكترونيات
2.10.5.1. أجهزة الطيران الآلي القياسية في الطائرات من طراز كينج أير 350 إي أر هو نظام الإلكترونيات المتكامل روكويلكولينزبرولين 21. ويبسط هذا النظام التشغيل بواسطة طيار واحد ويضيف مستوى إضافي من السلامة للطائرات. ويتميز النظام بنظام معالج إلكترونيات متكامل، ونظام طيران آلي إلكتروني، ونظام مؤشر المحرك، ونظام بيانات الطيران، ونظام توجيه الارتفاع، ونظام توجيه الطيران الأوتوماتيكي، ونظام إدارة الرحلة، ونظام رادار الطقس، ومجموعة كاملة من راديو الملاحة والاتصال.
2.10.5.2. الأوضاع الاستراتيجية لمدير الرحلة والطيار الآلي تحسن إدراك الموقف وزيادة السلامة. ويمكن للطيار ضبط ارتفاع خطير، وتغييرات التوجيه والملاحة بدون النظر إلى أسفل حيث إن نظام توجيه الرحلة كولينز يوفر توجيهًا دقيقًا وموثوقًا حيث إنه يشمل نقاط ومناهج توجيه عديدة.
2.10.6. نظام معالج الإلكترونيات المتكامل
2.10.6.1. يوفر نظام معالج الإلكترونيات المتكامل تركيز بيانات وحساب ضبط الرحلة وحساب إدارة الرحلة، ويحتوي على قفص بطاقات متكامل (ICC-3000) يحتوي على وحدات خطوط قابلة للاستبدال. ويوفر نظام معالج الإلكترونيات المتكامل حماية من الحقول ذات الإشعاعات عالية الكثافة، وإضاءة لجميع الوحدات، بالإضافة إلى فصل كهربائي بين الإشارتين اليسرى واليمنى.
2.10.6.2. كما يستخدم نظام معالج الإلكترونيات المتكامل وحدتي DCU-3000 إضافيتين لرقمنة واجهة الطائرة من أجل تركيب الإلكترونيات لقيادة بلاغات الطائرة والأبواق الأذنية.
2.10.7. نظام معلومات الرحلة المتكامل
2.10.7.1. يشتمل نظام روكويلكولينز برولين 21 نظام معلومات الرحلة متكامل يوفر خصائص محسنة للخريطة من أجل العرض التقليدي (مثل الأنهاء والبحيرات والحدود المحلية والمسارات الجوية وتصورات المجال الجوي). وبالإضافة إلى ذلك، يتم تزويد بيانات الطقس مرسومة متصلة بالبيانات التفاعلية للعرض على شاشة متعددة الوظائف. وتتصل وحدة خادم الملف بكابل إيثرنت MFD، ويوفر واجهة التحكم بهذه الخصائص المحسنة باستخدام لوح تحكم مؤشرة. ويتم تزويد الخرائط الإلكترونية وتحديثات الطقس الرسومية باشتراك لمدة عام واحد لمنطقة التغطية في الوطن المختارة بواسطة العميل.
2.10.8. النظام الإلكتروني للطيران الآلي
2.10.8.1. يحتوي النظام الإلكتروني للطيران الآلي على شاشة عرض رحلة رئيسة Collins AFD-3010 على لوحتي الطيار ومساعد الطيار، وشاشة متعددة الوظائف AFD-3010 مجاورة لشاشة عرض الرحلة الرئيسة الخاصة بالطيار.
2.10.8.2. تحتوي شاشة عرض الرحلة الرئيسة على الاتجاه وتوجيه الرحلة والسرعة والسرعة الرأسية والارتفاع ومؤشر الموقف الأفقي والملاحة ومعلومات نمط توجيه الرحلة.
2.10.8.3. تعرض شاشة عرض الرحلة الرئيسة معلومات القيم المرجعية
أنجليزي إلى عربي: Contrct General field: القانون/براءات الاختراع Detailed field: القانون: العقود
- Responded to queries from the Saudi Patent Office staff, and, if
required, communicate the same in writing to related clients.
- Whenever there was a translation found of poor quality , I
proofread such in order to comply with the commonly accepted
standards.
- January 01, 1992-June 01, 2007, as a Medical Translator at Riyadh
Care Hospital, Riyadh, K. Saudi Arabia; I was in charges of EA translation
of all medical reports and contracts between the
Hospital and the corporate clients. During the same period, I had
been an A-E/E-A freelance Translator at AGIP-KSA; therein,I with
other colleagues translated patent texts of all areas of specialties.
- 1987-1990, Shindy and Associates, a Cairo–based consultation firm;
I was one of a translation team in charge of translating financial and
economic texts from Int'l English periodicals such as The Financial
Times, The Economist, International Monetary Fund Survey, etc.
كلمات مفتاحية: DTP
Patent
Legal translation
Contract translation
Market research
Data collection
Linguistic check
Document translation
Business translation
IP translation
الخبرة